高通量的PCR模板植物基因組DNA制備方法（四）
2.3 高通量的分子標記檢測 本方法制備的DNA濃度雖然低，用96針復制器加入0.5~1 μL模板進行33~35個PCR循環就可獲得足夠濃度的產物，并不需要加入特別多的Taq酶(甚至使用量為每45~50 μL PCR反應液1 U也能擴增分子標記)。該方法已對數萬份水稻樣品進行了分子標記(SSR、InDel等)檢測，成功率一般可達95%以上。事實上，用微量提取法(經乙醇沉淀)粗提的基因組DNA往往由于樣品間濃度差別大，定量不準確，容易加入過多的模板DNA而抑制PCR (粗提的基因組DNA也含有相當多的雜質)，因而用微量提取法粗提基因組DNA進行PCR擴增的成功率和整齊度反而不如本文介紹的方法好。圖3顯示若干PCR標記的實驗例，擴增效果和整齊性非常好。另外，還可以在同一個反應里做2個標記的PCR擴增(圖3-C)。Fig. 3 PCR marker-based genotyping using t......閱讀全文
高通量的PCR模板植物基因組DNA制備方法（四）
2.3 ?高通量的分子標記檢測?本方法制備的DNA濃度雖然低，用96針復制器加入0.5~1 μL模板進行33~35個PCR循環就可獲得足夠濃度的產物，并不需要加入特別多的Taq酶(甚至使用量為每45~50 μL PCR反應液1 U也能擴增分子標記)。該方法已對數萬份水稻樣品進行了分子標記(S
高通量的PCR模板植物基因組DNA制備方法（一）
摘? 要：制備大量生物樣品的模板DNA用于PCR檢測是費時費人工的工作。本文介紹一種高通量的植物基因組DNA(gDNA)快速制備及其用于PCR基因型檢測的操作方法。將一小段單子葉植物苗葉片(長度約30 mm或40 mm，與96方孔板的孔深大致相同) 或一小塊(約2~4 mg)雙子葉植物葉片放入9
高通量的PCR模板植物基因組DNA制備方法（三）
將純化定量的水稻品種(93-11)基因組DNA標準樣品(0.5~8 ng)與1.0 μL本方法制備的水稻品種(02428)基因組DNA混合作為模板，用InDel 標記引物(表1)進行PCR擴增和PAGE檢測。箭頭指某反應(或2個反應之間)其02428與93-11條帶的信號值大致相等(即DNA
高通量的PCR模板植物基因組DNA制備方法（二）
1.2? 植物材料 ?1.2.1 水稻秧苗。將1.6-mL 96方孔板底部用6 mm電鉆頭打穿，或將舊96孔PCR板的底部剪去約4 mm。使用時將方孔板壓入少量泥巴。每孔放入1粒萌動的水稻種子，在自然日光下(或人工氣候箱)生長至3~4片葉。其他植物小苗也可用類似方法種植。?1.2.2 水稻大植株的鮮
用于 PCR 的模板 DNA 制備實驗
酚-氯仿法提取石蠟組織中 DNA 改進的石蠟切片 DNA 提取方法 直接法（DNA 免提法） 冰凍片 含血標本 胸腹水或尿液 ? ? ? ? ? ?
用于 PCR 的模板 DNA 制備實驗
實驗方法原理 實驗步驟 1. 10 mm 厚石蠟切片 10～15 張，置入消毒后的 1.5 ml Eppendorf 管中。2. 脫蠟 二甲苯 1200 μl，9000 r/min，8 min×3。3. 脫水無水乙醇 1200 μl，9000 r/min，5 min×3。4. 打開 Eppendor
用于PCR的植物基因組DNA快速制備方法（一）
一種用于PCR的植物基因組DNA快速制備方法 來源：方統科技----------------------------------------------------------------------------------摘要： 本文介紹了一種用于PCR的植物基因組DNA的快速制備方法。該方法
用于PCR的植物基因組DNA快速制備方法（二）
2 結果與討論2.1 PCR模板DNA的快速制備本方法是將少量植物葉片在TE溶液或去離子水中，經鎢合金珠在離心管內的振蕩破碎，直接獲得DNA溶液。用多功能組織細胞研磨器（MTM-60）一次可操作60個樣品。瓊脂糖凝膠電泳表明，用TE和去離子水都可獲得分子量較大的DNA片段（圖1A）。用TE制備的DN
用于PCR的模板DNA制備實驗——改進的石蠟切片 DNA 提取方法
實驗步驟1. 5 μm 厚的石蠟切片 5 至 10 張貼在干凈的載玻片上，常規烘片，脫蠟，水化，蒸餾水清洗，無菌蒸餾水浸泡，取出晾至半干。2. 無菌尖頭刀片刮下，放入 300～900 μl 組織裂解液中，并加入 20 mg/ml 蛋白酶 K（PK）10～15 μl，封口膜封口，置 55℃ 3 h 以
PCR的模板制備
PCR的模板可以是DNA，也可以是RNA。 模板的取材主要依據PCR的擴增對象，可以是病原體標本如病毒、細菌、真菌等。也可以是病理生理標本如細胞、血液、羊水細胞等。法醫學標本有血斑、精斑、毛發等。 標本處理的基本要求是除去雜質，并部分純化標本中的核酸。多數樣品需要經過SDS和蛋白酶K處理。難