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要檢測一個基因的表達產物是否正確，或者比較表達產物量的相對變化，首選方法是Western Blot。雖然，順利的時候Western Blot做起來很簡單，可不順的時候也很令人心煩――做不出結果啦、假陽性啦、結果出現多條帶啦、到底是一抗有問題還是二抗有問題啦……畢竟，作為一種有活性的生物大分子，抗體和抗原的反應畢竟不象1+1那么明確，而用這種不確定的試劑來測定同樣知之甚少的表達產物，確實是有一定的不確定性的。所以，嚴謹的Western Blot實驗設計中要求有良好的參照體系，對實驗結果分析是非常有用的。我們知道，要用Western Blot比較不同條件下或者不同組織中，目的蛋白表達量的相對多少，前提條件是等量的細胞上樣，才有比較的基礎。特別表達量不高時，上樣量的差別就很可能影響結果的分析。艾美捷向您推薦使用內參抗體來檢測您的實驗系統，或者校準您的實驗結果。內參即是內部參照(Internal Control)，對......閱讀全文
在WB實驗中為什么需要使用內參抗體？進口內參抗體——在WB實驗中為什么需要使用內參抗體？ 要檢測一個基因的表達產物是否正確，或者比較表達產物量的相對變化，首選方法是Western Blot。雖然，順利的時候Western Blot做起來很簡單，可不順的
增殖細胞核抗原（Proliferating Cell Nuclear Antigen簡稱PCNA）由Miyachi等于1978年在 SLE（系統性紅斑狼瘡）患者的血清中首次發現并命名，因其只存在于正常增殖細胞及腫瘤細胞內而得名。PCNA是一種分子量為36KD的蛋白質，在細胞核內合成，并存在于
細胞色素c氧化酶(Cytochrome c oxidase，簡稱COX)是一種異源寡聚酶，通常含有13個亞基，定位于線粒體內膜，是線粒體呼吸鏈的酶復合物。細胞色素c氧化酶中形成催化中心的3個最大的亞基由線粒體DNA編碼，其余10個亞基包括COX IV由細胞核內的基因組DNA編碼。細胞色素
Actin即肌動蛋白，是細胞的一種重要骨架蛋白。Actin大致可分為六種，其中四種是不同肌肉組織特異性的，其余兩種廣泛分布于各種組織中，包括 β-actin和γ-non-muscle actin。β-actin作為內參是得到了公認的，這是針對大多數組織和細胞來說的，它廣泛分布于細胞漿內，表達
Tubulin即微管蛋白，是細胞的一種骨架蛋白。Tubulin分為α、β、γ、δ、ε等多種tubulin，其中α-Tubulin和β-Tubulin可以形成異源二聚體，是形成微管的最主要的兩種Tubulin。α-tubulin和β-tubulin分子量分別為55kDa和50kDa，其實際檢測條帶均在
在Western Bloting實驗中，可能存在總蛋白濃度測定不準確，或者蛋白質樣品在電泳前上樣時產生的樣品間的操作誤差；這些誤差可以通過測定每個樣品中實際轉到膜上的內參，比如內參GAPDH的含量來進行校正。GAPDH（甘油醛-3-磷酸脫氫酶）是參與糖酵解的一種關鍵酶，由4個30-40kDa的亞基組
GST標簽系統具有蛋白表達產率高、表達產物純化方便，以及利于GST抗體制備等特點和優勢。GST融合蛋白在水溶液中可溶，可從細菌裂解液中提取，在不變性的條件下通過親和層析得到，也可以直接被位點特異性蛋白酶裂解去除。正是由于以上的優點，商品化的GST融合蛋白表達體系以及GST標簽抗體系統至今仍被廣泛
GST標簽系統具有蛋白表達產率高、表達產物純化方便，以及利于GST抗體制備等特點和優勢。GST融合蛋白在水溶液中可溶，可從細菌裂解液中提取，在不變性的條件下通過親和層析得到，也可以直接被位點特異性蛋白酶裂解去除。正是由于以上的優點，商品化的GST融合蛋白表達體系以及GST標簽抗體系統至今仍被廣泛
要檢測一個基因的表達產物是否正確，或者比較表達產物量的相對變化，首選方法是Western Blot。雖然，順利的時候Western Blot做起來很簡單，可不順的時候也很令人心煩――做不出結果啦、假陽性啦、結果出現多條帶啦、到底是一抗有問題還是二抗有問題啦……畢竟，作為一種有活性的生物大分子
GFP（Green Fluorescent Protein，綠色螢光蛋白）是由下村脩等人在1962年在一種學名Aequorea victoria的水母中發現。其基因所產生的蛋白質，在藍色波長范圍的光線激發下，會發出綠色螢光。GFP標簽可位于蛋白質的C端或N端，該系統已廣泛 應用于各種細胞
為什么選擇組蛋白H3為細胞核的內參指標呢？當實驗樣品中只是核蛋白，而不是細胞總蛋白提取液時，可以用組蛋白H（Histone H），或者增殖細胞核抗原（PCNA）等為核內參抗體。除了這些，其它常見的核蛋白內參還有K70， K80， Lamin A和B。但是需要注意的問題是核蛋白內參的選擇需要考
GAPDH抗體大全——總有一款合適的GAPDH抗體在Western Bloting實驗中，可能存在總蛋白濃度測定不準確，或者蛋白質樣品在電泳前上樣時產生的樣品間的操作誤差；這些誤差可以通過測定每個樣品中實際轉到膜上的內參，比如內參GAPDH的含量來進行校正。當然除了GAPDH抗體，β-Actin抗體