WesternBlot過程中常見的問題及可能原因分析
問題可能原因驗證或解決辦法背景高膜沒有完全均勻濕透使用100% 甲醇浸透膜5-10min洗膜不充分增加洗液體積和洗滌次數阻斷不充分增加封閉液孵育時間，或者提高溫度。選擇合適的封閉試劑（脫脂奶粉，BSA，酪蛋白等）二抗濃度過高降低二抗濃度檢測過程中膜干燥保證充分的反應液，避免出現干膜現象曝光過度縮短曝光時間抗體與阻斷蛋白有交叉反應檢測抗體與阻斷蛋白的交叉反應性，選擇無交叉反應的封閉劑。洗滌液中加入Tween-20可減少交叉反應沒有陽性條帶，或者陽性條帶比較弱抗體染色不充分增加抗體濃度，延長孵育時間酶失活直接將酶和底物進行混合，如果不顯色則說明酶失活了。選擇在有效期內、有活性的酶聯物標本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低設置陽性對照，如果陽性對照有結果，但標本沒有則可能是標本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低。可考慮增加標本上樣量解決靶蛋白含量低的原因。試劑不匹配一抗與組織種屬，一抗與二抗或/和底物與酶系統之間不匹配。通過設置內參照可以驗證二級......閱讀全文
Western Blot過程中常見的問題及可能原因分析
問題可能原因驗證或解決辦法背景高膜沒有完全均勻濕透使用100% 甲醇浸透膜5-10min洗膜不充分增加洗液體積和洗滌次數阻斷不充分增加封閉液孵育時間，或者提高溫度。選擇合適的封閉試劑（脫脂奶粉，BSA，酪蛋白等）二抗濃度過高降低二抗濃度檢測過程中膜干燥保證充分的反應液，避免出現干膜現象曝光過度縮短曝
western blot常見問題及解答
常見問題及解答： 1 、兩快玻璃板之間灌膠 , 膠為什么總是不平 ? 1)你的玻璃洗干凈沒有？應該要洗得非常干凈！ 2)過硫酸銨和TEMED的加量不合適，加量相對較多，凝膠凝固過快也會膠不平，最多按照分子克隆加倍 3)加完試劑以后沒有很好的搖勻，導致有些部位的聚合劑濃度過高，聚合相對較快
Western Blot常見問題總結
Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，經過PAGE分離的蛋白質樣品，轉移到固相載體上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質，且能保持電泳分離的類型及其生物學活性不變。以固相載體上的蛋白質或多肽作為抗原，與對應的抗體起免疫反應，再與或標記的第二抗體起反應，經過底物顯色或放射自顯影以檢測電
巴傲得生物，WB過程中常見的問題及可能原因分析
WB過程中常見的問題及可能原因分析問題可能原因驗證或解決辦法背景高膜沒有完全均勻濕透使用100%?甲醇浸透膜5-10min洗膜不充分增加洗液體積和洗滌次數阻斷不充分增加封閉液孵育時間，或者提高溫度。選擇合適的封閉試劑（脫脂奶粉，BSA，酪蛋白等）二抗濃度過高降低二抗濃度檢測過程中膜干燥保證充分的反應
免疫印跡（Western Blot）常見問題及建議
? ? ? ? ? 問題? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 可能原因? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 建議電泳條帶成笑臉狀膠不均勻冷切，中間冷卻不好，電泳系統溫度偏高減少電壓減慢電泳速度，在冷室或者冰浴中進行電泳電泳條帶成皺眉狀可能是由于裝置不合適，特別可能是凝膠和玻璃
western blot技術要點和WB常見問題分析
WB過程中常見的問題及可能原因分析
Western Blot詳解－常見的問題指南（二）
4. 濾紙、膠和膜的問題X. NC膜\ PVDF膜\ 尼龍膜怎樣鑒別？解答：尼龍膜是較理想的核酸固相支持物，有多種類型；硝酸纖維素膜是目前應用最廣的一種固相支持物，價格最便宜；PVDF膜介于二者之間。就結合能力而言：尼龍膜結合DNA和RNA能力可達480－600μg/cm2，可結合短至10bp的核酸
Western Blot詳解－常見的問題指南（三）
6. 染色的選擇OO. Western Blot哪種染色好？解答：（1）陰離子染料是最常用的，特別是氨基黑，脫色快，背景低檢測極限可達到1.5μg，考馬雖然與氨基黑有相同的靈敏度，但脫色慢，背景高。麗春紅S和快綠在檢測后容易從蛋白質中除去 ，以便進行隨后的氨基酸分析。缺點是：溶劑系統的甲醇會引起硝化
Western Blot詳解－常見的問題指南（一）
?實驗常見的問題指南根據問題的類型主要分成以下幾類（以下資料權作參考，請勿盲目模仿！）：1.?參考書推薦A.?對初學者看什么資料比較好？解答：《抗體技術實驗指南》和Antibodies（a laboratory manual， wrote by Ed Harlow ，david lane）兩本書不錯
Western Blot詳解－常見的問題指南（四）
9. 條件的摸索DDD. 用的是Santa Cruz的抗體，也實驗過一抗和二抗肯定能結合，二抗加DAB肯定能顯色。電泳的膠用考馬斯亮藍染色沒問題，但是不知道與Marker對應的條帶是否是我要的（我目的蛋白的分子量分別是55KD、29KD）。半干法2小時轉膜后，麗春紅染色發現大分子量蛋白轉過去的較少。