大規模蛋白質相互作用研究方法進展（二）
這一經典的蛋白相互作用研究方法接近于體內環境，那些瞬時、不穩定的兩兩相互作用也可以被檢測到，并且與內源蛋白的表達無關[6]。鑒于這些優點并結合簡便高效的Gateway表達載體構建方法[7]，在大規模的蛋白質－蛋白質相互作用研究中酵母雙雜交系統得到了最為廣泛的應用。Rain 等[8]用該法繪制了人類胃腸道病原菌Helicobacter pylori 的大規模蛋白質相互作用圖譜。在261 種蛋白中，確立了 1200 種相互作用關系，涵蓋了整個蛋白質組得46. 6%。隨后，Giot 等[9]和Li 等[10]在果蠅和線蟲中也成功地研究了大規模的蛋白質相互作用。除了對模式生物的研究外，Stelzl 等[11]和Raul 等[12]則先后分析了人腦組織、人已知ORF中大規模的蛋白質相互作用網絡。但酵母雙雜交方法本身也有一定的局限性：(1)不能研究具有自激活特性的蛋白質；(2)只能檢測兩個......閱讀全文
大規模蛋白質相互作用研究方法進展（二）
這一經典的蛋白相互作用研究方法接近于體內環境，那些瞬時、不穩定的兩兩相互作用也可以被檢測到，并且與內源蛋白的表達無關[6]。鑒于這些優點并結合簡便高效的Gateway表達載體構建方法[7]，在大規模的蛋白質－蛋白質相互作用研究中酵母雙雜交系統得到了最為廣泛的應用。Rain?等[8]用該法繪制了人類胃
大規模蛋白質相互作用研究方法進展（一）
?來源：生命科學 關 薇, 王 建, 賀福初*（軍事醫學科學院放射與輻射醫學研究所，北京 100850）? 摘 要：隨著2000?年酵母大規模蛋白質相互作用網絡圖譜的成功描繪，蛋白質相互作用特別是大規模蛋白質相互作用研究成為生命科學領域的又一個研究熱點。酵母、果蠅、線蟲以及人類蛋白的大規模相
大規模蛋白質相互作用研究方法進展（四）
表1 蛋白質相互作用分析相關數據庫及網站? 網站 資源類型 網址? DIP? 蛋白質相互作用http: //dip.doe-mbi.uda.edu? INTERACT? 蛋白質相互作用http: //bioinf.man.ac.uk/interactpr.htm? ProNet? 蛋白質相互作用ht
大規模蛋白質相互作用研究方法進展（三）
? ?????????圖1 TAP親和層析純化原理[14]? 注：A:標簽中的ProteinA 與固化的IgG 結合緩沖液淋洗去除不能結合的雜蛋白，TEV 酶切分離ProteinA ? 和靶蛋白；B:利用CBP(Calmodulin binding peptide)-Calmodulin ? 的相互
蛋白質相互作用組研究獲進展
蛋白質相互作用組是指蛋白質之間的基本相互作用，對于大多數物種而言，其在很大程度上都是未知的。因而，研究探索膜蛋白潛在的相互作用組必然是一項極具挑戰性的工作。 美國斯坦福大學卡耐基科學研究所Jones等研究人員，使用構建好的分裂泛素化酵母試驗系統，從擬南芥中篩選鑒定出超過3000個膜蛋白之間的相
蛋白質間相互作用研究方法1
LY: 宋體; mso-ascii-font-family: 'Times New Roman'; mso-hansi-font-family: 'Times New Roman'">融合蛋白進行Far Western印跡來檢測蛋白質-蛋白質相互作用 ?放射標記蛋白探
蛋白質間相互作用研究方法1
確定各種可能與目標蛋白相互作用的蛋白質，“撒大網” l????????雙雜交和其他雙成分系統 第一階段：誘餌-LexA融合蛋白的鑒定 誘餌-LexA融合蛋白的構建 1．將編碼誘餌蛋白的靶DNA克隆到LexA融合載體的多聚接頭處，以合成一種框架內的LexA融合基因。確定誘餌序列的羧基端存在翻
蛋白質間相互作用研究方法3：BIAcore
快速分析過去已確定的相互作用l??????利用BIAcore通過表面胞質基因共振光譜學分析相互作用的蛋白質RAMc通過伯氨基與CM-5傳感芯片表面的結合1．將CM-5傳感芯片模塊嵌入BIAcore儀器。2．全部采用過濾并除氣的HEPES緩沖鹽溶液。3．將分別含有NHS、EDC、乙醇胺和RAM Fc以
蛋白質間相互作用研究方法：免疫共沉淀
相互作用在生理上的證實和探索l??????通過免疫共沉淀確定結合蛋白1．用磷酸鹽緩沖液洗30塊10 cm培養板上的適宜細胞。刮去每塊板上的細胞到1 ml冰冷的EBC裂解緩沖液中。2．將每毫升細胞懸液轉移到微量離心管中，在微量離心機上4℃以最大速度離心15 min。3．收集上清（約30 ml）并加入3
研究蛋白質與DNA相互作用的主要方法
一、引言 在許多的細胞生命活動中，例如DNA復制、mRNA轉錄與修飾以及病毒的感染等都涉及到DNA與蛋白質之間的相互作用的問題。 重組DNA技術的發展，人們已分離到了許多重要的基因。現在的關鍵問題是需要揭示環境因子及發育信號究竟是如何控制基因的轉錄活性。為此需要： a、鑒定分析