單細胞mRNA差異顯示實驗
實驗方法原理 ##流程圖試劑、試劑盒 溶液和緩沖液儀器、耗材 水浴槽PCR熱循環儀微量離心機塑料制品和濾器實驗步驟 一、RNA 的分離收集對照組和實驗組細胞，放入含 45ul2 mmol/L DTT 的 1.5 ml 微量離心管中。95℃ 水浴熱解 2 min。每管加入以下物質：37℃ 溫育 30 min。加以下物質：溫育 37℃15 min。加 DEPC 處理過的 H2O 至終體積 200ul。加 200ul 酚/氯仿/異戊醇（25:24:1)。振蕩 30s。微量離心機 14OOOg 離心 5 min。將上清轉移到干凈的 1.5 ml 管中，加 200ul 氯仿/異戊醇（24:1)。振蕩 30s。微量離心機 14000 裒離心 2 min。加入 1ul(10ug）糖原，20ul3mol/L 乙酸鈉（pH5.2) 和 600ul 100% 乙醇,-20℃ 過夜沉淀 RNA。注意：在以下所沉淀步驟中不需要加糖原和過夜。在 4℃ 微......閱讀全文
單細胞mRNA差異顯示實驗
目前有幾種方法可以顯示生理刺激下組織樣本中未知基因的表達水平變化。然而, 很多組織內的細胞又存在形態和功能上的異質性，因此常常需要從單個細胞水平研究基因表達的差異。現在，我們介紹一種新方法，它常規用來在單細胞水平考察未知基因的差異性表達。 現代神經科學研究技術 作者：U.Windhorst?&?H
單細胞mRNA差異顯示實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 ##流程圖 試劑、試劑盒 溶液和緩沖液 儀器、耗材
單細胞mRNA差異顯示實驗
實驗方法原理 ##流程圖試劑、試劑盒 溶液和緩沖液儀器、耗材 水浴槽PCR熱循環儀微量離心機塑料制品和濾器實驗步驟 一、RNA 的分離收集對照組和實驗組細胞，放入含 45ul2 mmol/L DTT 的 1.5 ml 微量離心管中。95℃ 水浴熱解 2 min。每管加入以下物質：37℃ 溫育 30
mRNA 的 PCR 差異顯示實驗
實驗方法原理 實驗材料 人的細胞總 RNA 或 poly（A）＋ RNA試劑、試劑盒 人胎盤 RNase 抑制劑DNase ITris·ClKClMgCl23：1 （V V） 苯酚 氯仿乙酸鈉乙醇DEPC 處理的水簡并錨定 oligo（dT） 引物組合MoMuLV 逆轉錄酶緩沖液DTT4dN
mRNA 的 PCR 差異顯示實驗
對應于 mRNA 的 DNA 序列，可以被回收、克隆、測序，可以用作雜交或篩庫的探針。來源：《精編分子生物學實驗指南（第五版）》實驗材料人的細胞總 RNA 或 poly（A）＋ RNA試劑、試劑盒人胎盤 RNase 抑制劑DNase ITris·ClKClMgCl23：1 （V V） 苯酚 氯仿乙酸
mRNA 的 PCR 差異顯示實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料 人的細胞總 RNA 或 poly（A）＋ RNA 試劑、試劑盒
mRNA差異顯示技術(mRNA differetial display)(2)
6.技術路線 mRNA 差異顯示技術 The fluoroDD System ?Builds on the HIEROGLYPH? system –TMR-labeled anchored primers –Increased primer concentrations –I
mRNA差異顯示技術(mRNA differetial display)(1)
1.概 述mRNA差異顯示技術（mRNA differetial display）是一種快速有效的克隆差異性表達基因的方法。 方法建立：1992年 Liang P和Pardee首次應用DD技術對比人類乳腺癌細胞與正常細胞所表達的mRNA，以此來克隆癌細胞所特有的基因 目前已應用于個各領域：
mRNA差異顯示技術的原理
差異基因表達是細胞分化的基礎。正是這些基因在細胞中的特異表達與否，決定了生命歷程中細胞的發育和分化、細胞周期的調節、細胞衰老和死亡等。mRNA DD-PCR技術正是對組織特異性表達基因進行分離的一種快速而行之有效的方法。不同的組織/細胞或遺傳背景相同的同一組織/細胞經過不同的處理后，提取各自的總
差示反轉錄PCR實驗——mRNA差異顯示法
實驗方法原理幾乎所有的真核基因mRNA分子的3’-末端，都帶有一個多聚的腺苷酸結構，即通常所說的poly(A)尾巴。因此，在RNA聚合酶的作用下，可按mRNA為模板，以oligo(dT)為引物合成出cDNA拷貝。根據mRNA分子3’-末端序列末端結構的分析可以看到，在這段poly(A)序列起點堿基之