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實驗材料 DNA試劑、試劑盒 霧水乙醇EDTAT4 DNA連接酶TENaCl儀器、耗材 培養箱水浴鍋實驗步驟 1. 用Bal 31或外切核酸酶Ⅲ及S1核酸酶在質粒的目的區域產生一嵌套式的5’或3端'缺失突變體。首先在目的序列附近用一限制酶使質粒線性化，在用Bal 31消化時，應確定其切割效率，以便弄清毎切割6~8個目的堿基對和覆蓋待誘變區所需的時間。 2. 將合成接頭與經適當時間酶切處理的DNA連接。用適當的限制酶進行切割以產生在缺失末端上帶有接頭而在另一端上含有載體位點的片段。3. 用低熔點瓊脂糖凝膠分離目的片段，將該片段與載體片段相連，以產生帶缺失突變的完整質粒。4. 用連接混合物轉化合適的大腸桿菌，挑克隆，小量制備質粒DNA。5. 用限制性內切酶消化小量制備的質粒DNA，以產生一端含缺失終點的小DNA片段，進行非變性聚丙烯酰胺或篩分型瓊脂糖凝膠電......閱讀全文
實驗材料 DNA 試劑、試劑盒 霧水乙醇 EDTA
實驗材料 DNA試劑、試劑盒 霧水乙醇EDTAT4 DNA連接酶TENaCl儀器、耗材 培養箱水浴鍋實驗步驟 1. 用Bal 31或外切核酸酶Ⅲ及S1核酸酶在質粒的目的區域產生一嵌套式的5’或3端'缺失突變體。首先在目的序列附近用一限制酶使質粒線性化，在用Bal 31消化時，應確
實驗方法原理 接頭是指合成的能夠自身互補的 DNA 片段，一般長 8~16 個核苷酸，互補的片段復性后可形成平末端的含有一個酶切位點的雙鏈分子。實驗材料 T4 噬菌體連接酶T4 噬菌體多聚核苷酸激酶限制性內切核酸酶外源或目的 DNA 片段試劑、試劑盒 乙酸胺ATP乙醇1
實驗材料 適用于轉化的大腸桿菌菌株 用于轉化的大腸桿菌 TG1 感受態菌 試劑、試劑盒
實驗方法原理 接頭是指合成的能夠自身互補的 DNA 片段，一般長 8~16 個核苷酸，互補的片段復性后可形成平末端的含有一個酶切位點的雙鏈分子。
實驗材料 適用于轉化的大腸桿菌菌株 用于轉化的大腸桿菌 TG1 感受態菌試劑、試劑盒 ATPPE1緩沖液PE2 緩沖液噬菌體 T4 DNA 連接酶噬菌體 T4 多核苷酸激酶大腸桿菌 DNA 聚合酶ⅠKlenow 片段M13 噬菌體通用測序引物含 4 種 dNTP 的 dNTP 溶液誘變的 M
· In Vitro Mutagenesis Using Altered Sites (Bowtell Lab) In vitro Mutagenesis with dut
誘變 PCR 最大的優勢是以一種沒有偏好的方式引入了各種類型的突變，而不是獲得高水平的單一的擴增。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。試劑、試劑盒氯仿 異戊醇乙醇礦物油或者一個蠟珠3mol L NaOAc5 mmol L MnCl2突變 PCR 緩沖液DNA 聚合酶Nati
試劑、試劑盒 氯仿 異戊醇 乙醇 礦物油或者一個蠟珠 3mol L NaOAc 5 mmol L M
實驗材料 帶 mutS 表型（例如 BMH71-18) 的轉化用大腸桿菌感受態 帶 mut+表型的轉化用大腸桿菌感受態