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實驗材料 DNA試劑、試劑盒 霧水乙醇EDTAT4 DNA連接酶TENaCl儀器、耗材 培養箱水浴鍋實驗步驟 1. 用Bal 31或外切核酸酶Ⅲ及S1核酸酶在質粒的目的區域產生一嵌套式的5’或3端'缺失突變體。首先在目的序列附近用一限制酶使質粒線性化，在用Bal 31消化時，應確定其切割效率，以便弄清毎切割6~8個目的堿基對和覆蓋待誘變區所需的時間。 2. 將合成接頭與經適當時間酶切處理的DNA連接。用適當的限制酶進行切割以產生在缺失末端上帶有接頭而在另一端上含有載體位點的片段。3. 用低熔點瓊脂糖凝膠分離目的片段，將該片段與載體片段相連，以產生帶缺失突變的完整質粒。4. 用連接混合物轉化合適的大腸桿菌，挑克隆，小量制備質粒DNA。5. 用限制性內切酶消化小量制備的質粒DNA，以產生一端含缺失終點的小DNA片段，進行非變性聚丙烯酰胺或篩分型瓊脂糖凝膠電......閱讀全文
Linker scanner mutations （接頭分區突變）：體外在限制性片段加上位點，使兩個DNA分子發生重組產生，結果在重組的位點加上連接序列。實驗材料DNA試劑、試劑盒霧水乙醇EDTAT4 DNA連接酶TENaCl儀器、耗材培養箱水浴鍋實驗步驟1. 用Bal 31或外切核酸酶
實驗材料 DNA 試劑、試劑盒 霧水乙醇 EDTA