大規模PCR制作cDNA微陣列實驗（一）
試劑、試劑盒 緩沖液、溶液和試劑生物分子 酶和酶緩沖液核酸和寡核苷酸凝膠儀器、耗材 專用設備實驗步驟 第 1 階段：影印鋪板與工作庫的制備一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑羧芐西林（100ug/ml 儲存溶液）乙醇（100%)甘油，45%(體積分數）LB 液體培養基。（1L LB 液體培養基含有 10 g 胰蛋白胨、5 g 酵母提取物、5 gNaCl)超級液體培養基。(1L 超級液體培養基含有 32 g 胰蛋白胨、20 g 酵母提取物、5 gNaCl、5 ml 1mol/LNaOH）2. 生物分子核對過序列的母系克隆或 EST(例如，gf211release，ResearchGenetics)3. 其他儀器具有水平（吊桶式）轉頭的離心機，深度 6.2 cm, 可以離心微量滴定板和過濾板（例如，Sorvall SuperT 21，Sorvall)Airpore Tape Sheets(Qiagen)Bunsen 噴燈培養箱，預設為 ......閱讀全文
大規模－PCR－制作－cDNA－微陣列實驗（一）
試劑、試劑盒 緩沖液、溶液和試劑生物分子 酶和酶緩沖液核酸和寡核苷酸凝膠儀器、耗材 專用設備實驗步驟 第 1 階段：影印鋪板與工作庫的制備一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑羧芐西林（100ug/ml 儲存溶液）乙醇（100%)甘油，45%(體積分數）LB 液體培養基。（1L LB 液體培養基含有 10
大規模－PCR－制作－cDNA－微陣列實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 緩沖液、溶液和試劑 生物分子 酶和酶緩沖液 核酸和寡核苷酸 凝膠 儀器、耗材
大規模－PCR－制作－cDNA－微陣列實驗
本方案描述了通過 PCR 擴增產物，來制作 cDNA 微陣列的實驗步驟。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。試劑、試劑盒緩沖液、溶液和試劑生物分子酶和酶緩沖液核酸和寡核苷酸凝膠儀器、耗材專用設備實驗步驟第 1 階段：影印鋪板與工作庫的制備一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑羧芐
大規模－PCR－制作－cDNA－微陣列實驗（二）
第 3 階段：克隆的擴增與 PCR 產物的評估一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑DEPC 處理過的 H20TAE 緩沖液，1×（40 mmol/L Tris-乙酸鹽，1 mmol/L EDTA，pH 約 8.5)DNA 點樣緩沖液（200 g/LFicoll400，0.1mol/LNa2EDTA，pH
組織微陣列的制作
實驗概要本文介紹了組織微陣列(TMAs)的制作原理及基本操作流程。實驗原理組織微陣列原理是借鑒計算機平行分析的思維 ,對生物信號進行平行分析。利用微點陣技術 ,借助于機械手將成千上萬的組織片點陣固定于固相載體上,可進行常規 HE染色 ,也可以與標記的樣品進行聚合酶鏈反應、熒光原位雜交、免疫組
蛋白質微陣列如何制作？
構建蛋白質陣列文庫的第一步是建立全長cDNA表達文庫，再將cDNA文庫轉化成蛋白質文庫。原則上所有cDNA都可以用于蛋白質文庫的構建，然而大多數蛋白質因不具備體外可檢測的生物活性，因而不適于文庫篩選。能適用于體外高通量功能篩選的蛋白質主要有細胞膜“表面蛋白”和“分泌型蛋白”。大部分分泌型蛋白質在氨基
基于－PCR－的差減－cDNA－克隆實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料 A 和 B 類細胞的雙鏈 cDNA （ds cDNA） 試劑、試劑盒
基于－PCR－的差減－cDNA－克隆實驗
實驗方法原理 實驗材料 A 和 B 類細胞的雙鏈 cDNA （ds cDNA）試劑、試劑盒 ALuIRsaIATPT4 多聚核苷酸激酶及其緩沖液DNA連接酶和及其緩沖液Taq DNA聚合酶及其緩沖液寡核苷酸引物4dNTP 混合物驅動 dNTP 混合物轉化感受態菌株HEPES緩沖液鏈霉親和素溶
基于－PCR－的差減－cDNA－克隆實驗
差減克隆是分離和鑒定兩個細胞群中差異表達的 mRNA 的有效技術。相比較的細胞類型是［＋］（或 測 試）細胞和［-］（或驅動）細胞，在測試細胞中表達而不在驅動細胞中表達的 mRNA 將被分離出來。必需的差減次數主要取決于 cDNA 的多樣性。多樣性是指每一個細胞類型中不同的cDNA 或 cDNA 片
使用實時定量－PCR技術驗證cDNA和差異顯示PCR技術（一）
采用通過監測產物積累進行的實時反轉錄聚合酶鏈式反應（ RT － PCR ）可以用來驗證基因表達的差異。我們在此報道了一種基于 SYBR Green I 染料進行的實時 PCR 定量方法并通過產物的融解曲線來確定在基因表達譜方法中確定的基因表達差異的重復性。因為 SYBR Green I
cDNA－合成實驗
試劑、試劑盒二硫蘇糖醇dNTP隨機引物來自方案 4 的 RNA 樣品RNasin反轉錄緩沖液儀器、耗材PCR 管子熱循環儀實驗步驟一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑0.1mol/L 二硫蘇糖醇dNTP(每種 2.5 mmol/L)隨機引物（20~40U/ml)(1034731，RocheApplied
cDNA－合成實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 二硫蘇糖醇 dNTP 隨機引物 來自方案 4 的 RNA 樣品 RNasin 反轉錄緩沖液
cDNA－合成實驗
試劑、試劑盒 二硫蘇糖醇dNTP隨機引物來自方案 4 的 RNA 樣品 RNasin反轉錄緩沖液儀器、耗材 PCR 管子 熱循環儀實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑0.1mol/L 二硫蘇糖醇dNTP(每種 2.5 mmol/L)隨機引物（20~40U/ml)(1034731，RocheAp
DNA微陣列技術介紹及其應用
DNA微陣列技術（microarray）指在固體表面（玻璃片或尼龍膜）上固定成千上萬DNA克隆片段，人工合成的寡核苷酸片段，用熒光或其他標記的mRNA,cDNA或基因組DNA探針進行雜交，從而同時快速檢測多個基因表達狀況或發現新基因，快速檢測DNA序列突變，繪制SNP遺傳連鎖圖，進行DNA序列分析等
PCR實驗技術（一）
PCR（聚合酶鏈式反應）【原理】PCR（polymerase?chain?reaction）用于在體外將微量的目標DNA大量擴增，以便進行分析。反應體系：①樣品DNA；②引物（primer），是人工合成的一對寡核苷酸鏈（約15-20個核苷酸），用于擴增夾在雙引物與模板DNA互補區之間的區域；③4種d
RTPCR擴增目的基因cDNA
實驗概要學習從細胞或組織的RNA中用逆轉錄PCR擴增目的基因的技術及操作。實驗原理普通PCR方法可以以DNA為模板擴增基因，但真核生物的基因組中通常分為可轉為mRNA的外顯子和不轉錄的成mRNA的內含子，所以從染色體DNA用PCR方法擴增出的基因是內含子和外顯子相間排列的DNA分子，不能用于基因工程
熒光定量pcr的cdna濃度要求
1-100ng/ul（工作濃度）。濃度太低和太好都會影響擴增效率，但并不是絕對的。因為有一些基因表達水平極低，有一些在特殊情況下又極高。qPCR很多時候僅僅反映的是幾個樣品之間的趨勢，而不是絕對值。你先把cdna進行梯度稀釋，然后進行pcr，如果你的primer所擴增的ct值在15-25之間，那么就
cdna濃度不一致對pcr結果影響大嗎
測CDNA濃度或者測直接濃度梯度RT-PCR控制內參目基CT值概1830間啦
PCR時cDNA濃度過大會影響PCR結果嗎
濃度大會影響，一般試劑說明都有推薦濃度的。最好按試劑說明選取適當的濃度
常規動物實驗模型制作（復制）方法（一）
一、腫瘤動物模型的建立將對數生長的腫瘤細胞收集?，?用無血清基質?10.0ml，?于?1500?轉/?分，?離心3min，?連續洗?3?次，?最后用無血清基質混勻，?用血球計數器計算腫瘤細胞數量(?平均?5?個中方格的細胞計數×104即是腫瘤數/?毫升)?。?計算完腫瘤細胞總數，?再將?腫瘤細胞密度
生物芯片入門（五）：應用
基因芯片技術及其研究現狀和應用前景生物芯片技術是隨著“人類基因組計劃”（human genome project，HGP）的進展而發展起來的，它是90年代中期以來影響最深遠的重大科技進展之一，它融微電子學、生物學、物理學、化學、計算機科學為一體的高度交叉的新技術，具有重大的基礎研究價值，又具
RNA分析的幾個熱點領域及主要技術路線
DNA，RNA和蛋白質是三種重要的生物大分子，是生命現象的分子基礎。基因組DNA中的基因通過轉錄為mRNA并進一步翻譯為蛋白質，很多種類的蛋白質在最終發揮功能時又經歷磷酸化、糖基化、酶原激活等翻譯后修飾。DNA的遺傳信息決定生命的主要性狀，而mRNA在信息傳遞中起很重要的作用。其它兩大類RNA，rR
高密度光纖芯片技術及其在功能基因組學中的應用
DNA微陣列技術的發展[1]帶來了基因表達研究方法上的一場革命。傳統的Northern blots或RT-PCR方法只能逐一地研究單個基因的表達，而DNA微陣列技術可以同時例行檢測成千上萬個基因表達水平的變化，在微芯片上置入寡核苷酸探針或相應于mRNA序列的cDNA，與細胞cDNA或cRNA進行雜交
PCR技術（十七）：用PCR擴增cDNA庫中的特異序列
最常用的基因分離方法需要建立組織或細胞RNA的cDNA庫，然后用抗體或 DNA探針篩選出感興趣的基因。雖然這個方法已成功地克隆了大量基因，但建立和篩 選CDNA庫是一項非常耗時．費力的工作，而且用寡聚核苷酸作探針進行篩選需大量蛋 白質序列結構的資料。聚合酶鏈的反應（PCR）方法可使一種特異DNA擴增
cDNA－文庫的構建（一）
實驗材料 λ噬菌體臂大腸桿菌菌株用于λ噬菌體的包裝抽提物試劑、試劑盒 放線菌素 D二硫蘇糖醇EDTATris-ClMgCl2反轉錄酶RNase 抑制劑用于 cDNA 合成的寡核苷酸引物poly(A)+RNA[a-32P]dCTPEDTA乙醇(NH4)2SO4β-煙酰胺腺嘌呤二核苷酸T4
錨定酶消化cDNA實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 溶液與緩沖液 引物 儀器、耗材 試劑盒 MPC-E
錨定酶消化cDNA實驗
試劑、試劑盒 溶液與緩沖液引物儀器、耗材 試劑盒MPC-EPCR儀Gene PulserII 型系統實驗步驟 實驗方案 A1.通過加入下列物質來消化雙鏈 cDNA2.在 37°C 下消化 lh。3.65°C 孵育 20 min 熱失活限制性酶。4.等體積 PCI 抽提后乙醇沉淀（實驗方案 A, 第
cDNA－擴增和影印實驗
實驗方法原理 實驗材料 保存于細菌中的克隆純的、已測序確證的人 EST 序列試劑、試劑盒 LB 培養基超級肉湯培養基乙醇裂解液RNA 酶溶液緩沖液乙醇 乙酸溶液丁二酸酐1－甲基－2－吡咯烷酮硼酸鈉儀器、耗材 離心機96 孔熱循環儀水浴鍋微量滴定板清洗儀實驗步驟 實驗所需「材料」、「試劑」、「耗材」具
cDNA－擴增和影印實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料 保存于細菌中的克隆純的、已測序確證的人 EST 序列 試劑、試劑盒
錨定酶消化cDNA實驗
試劑、試劑盒溶液與緩沖液引物儀器、耗材試劑盒MPC-EPCR儀Gene PulserII 型系統實驗步驟實驗方案 A1.通過加入下列物質來消化雙鏈 cDNA2.在 37°C 下消化 lh。3.65°C 孵育 20 min 熱失活限制性酶。4.等體積 PCI 抽提后乙醇沉淀（實驗方案 A, 第 2 步