用于蛋白質表達的標簽實驗（一）
一、設計具有標簽的蛋白質時需要考慮的因素親和力和可溶性的選擇在大腸埃布氏菌中生產外源蛋白時面臨兩個挑戰: 一? 是所用蛋白質表達系統的表達水平很低; 二是所表達的蛋白質被錯誤折疊進不溶性的聚集體—包涵體中。弱啟動子、低轉錄起始或稀有密碼子的存在引起的表達問題都可以通過在裝配過表達質粒時將矯正序列（correctivesequence) 引入基因中和使用補充了稀有 tRNA 的大腸桿菌來得到解決。將高表達的內源性蛋白質融合在外源目標蛋白質的 N 端不僅是一個提高產量的方法，而且還可以增加目標蛋白質的可溶性: 這是可溶性標簽的基本原理。另外，親和標簽對蛋白質的純化至關重要，它提供了多種策略使目標蛋白質結合在親和基質上 (表 I6.1)。一些蛋白質標簽既可作為親和標簽，又可作為可溶性標簽。例如，谷胱甘肽-S-轉移酶 (glutathione-S-tamsferase，GST) 可以提高某些蛋白質的可溶性，而可溶......閱讀全文
標簽酶消化釋放標簽實驗
試劑、試劑盒 溶液與緩沖液LoTE 儀器、耗材 Eppendorf 試管 實驗步驟 實驗方案 A 1.向含有 Dynabeads 的每個試管中加入下列物質： 2.65℃ 下酶解 Ih(每 IOmin 混合 1 次)。 3.時收集上清液（含有釋放的 cDNA
標簽酶消化釋放標簽實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 溶液與緩沖液 LoTE 儀器、耗材 Eppendorf 試管 實
標簽酶消化釋放標簽實驗
試劑、試劑盒 溶液與緩沖液LoTE儀器、耗材 Eppendorf 試管實驗步驟 實驗方案 A1.向含有 Dynabeads 的每個試管中加入下列物質：2.65℃ 下酶解 Ih(每 IOmin 混合 1 次)。3.時收集上清液（含有釋放的 cDNA 標簽）4.用 LoTE 擴容到 200mL。5.等體
補平標簽實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 溶液與緩沖液 BSA LoTE cDNA標簽 實驗步驟
補平標簽實驗
是對差異顯示技術（DD）實驗和基因表達系列分析實驗中實驗方案A和B的補充實驗 現代神經科學研究技術 作者：U.Windhorst?&?H. Johansson? 翻譯：趙志奇 陳軍 實驗步驟 實驗方案 A 1.向兩個含有釋放的 cDNA 標簽的試管中加入： 2.在 37°C
補平標簽實驗
試劑、試劑盒?溶液與緩沖液BSALoTEcDNA標簽實驗步驟?實驗方案 A1.向兩個含有釋放的 cDNA 標簽的試管中加入：2.在 37°C 下孵育 30 min。3.加入 150ul LoTE 擴容到 200ul。4.如上所述，用等體積的 PCI 抽提，乙醇沉淀（實驗方案 A，第 2 步)。5.將
雙標簽的分離實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 溶液與緩沖液 BSA LoTE cDNA標簽 實驗步驟 一、用
連接為雙標簽實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 溶液與緩沖液 LoTE cDNA標簽 實驗步驟
雙標簽的分離實驗
試劑、試劑盒 溶液與緩沖液BSALoTEcDNA標簽 實驗步驟 一、用 NlaIII 消化雙標簽，釋放接頭 1.向 480ul 已純化的 PCR 產物中加入下列成分： 2.在 37℃ 下消化 Ih(不要熱失活酶，否則將致使 22~26bp 的小雙標簽變性)。 3.消化
連接為雙標簽實驗
是對差異顯示技術（DD）實驗和基因表達系列分析實驗中實驗方案A和B的補充實驗 現代神經科學研究技術 作者：U.Windhorst?&?H. Johansson? 翻譯：趙志奇 陳軍 試劑、試劑盒 溶液與緩沖液LoTEcDNA標簽 實驗步驟 實驗方案 A 1.此實驗方