植物蛋白質組學中的雙向電泳技術實驗（四）
3.3 第二向：多重垂直 SDS-PAGESDS-PAGE 可以在水平或垂直系統上進行 [29] 。水平設備適用于預制膠（ExcelGel SDS；Amersham Biosciences/ GE Healthcare) 。而垂直系統則應用于多塊膠平行進行的電泳中，尤其是大規模的蛋白質組分析中。這種分析通常需要同時進行數批第二向 SDS-PAGE 電泳以達到更高的通量和最好的重復性 [31] 。1. 灌制 SDS 膠( 1 ) 灌膠膠板（200 mm X 250 mm) 由兩塊書本形狀的 3 mm 厚的玻璃板組成。兩塊玻璃板用一根鉸鏈條連接，玻璃板之間有兩條 1 mm 厚的邊條。將 14 塊膠板垂直堆入 Ettan Dah II 的灌膠模具中。堆疊時鉸鏈條朝右，膠板之間用塑料分隔片（如 0.05 mm 厚聚酯片）分隔。( 2 ) 將灌膠模具的前板放好，旋上螺帽（用手擰緊）（圖 13-2)。( 3 ......閱讀全文
植物蛋白質組學中的雙向電泳技術實驗（四）
3.3 第二向：多重垂直 SDS-PAGESDS-PAGE 可以在水平或垂直系統上進行 [29] 。水平設備適用于預制膠（ExcelGel SDS；Amersham Biosciences/ GE Healthcare) 。而垂直系統則應用于多塊膠平行進行的電泳中，尤其是大規模的蛋白質組分析
植物蛋白質組學中的雙向電泳技術實驗
試劑、試劑盒尿素裂解溶液IPG 干膠條水化液IPG 膠條平衡液SDS 凝膠緩沖液電極緩沖液儲液丙烯酰胺 甲叉雙丙烯酰胺溶液過硫酸銨溶液瓊脂糖溶液儀器、耗材等電聚焦儀IPGphor多重垂直 SDS 電泳儀實驗步驟3.1 第一向：在 IPG 膠條中進行等電聚焦（ IPG-IEF)采用 IPG ( IPG
植物蛋白質組學中的雙向電泳技術實驗
試劑、試劑盒尿素裂解溶液 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?? IPG 干膠條水化液 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
植物蛋白質組學中的雙向電泳技術實驗（三）
使用 IPGphor 進行 IEF 的典型工作條件見表13-2和 表 13-3 。正如前文指出的那樣 ，為了使高分子質量的蛋白質更好地進入聚丙烯酰胺膠內，水化時應在膠條兩端加低電壓（30~50 V ) ，否則將給水化上樣造成困難[ 15，28] 。然后電壓逐步升高至 8000 V。如果 I
植物蛋白質組學中的雙向電泳技術實驗（二）
2. 在平板儀器上進行 IPG-IEF ( Multiphor ll Unit)滿足下列條件時，水化后的 IPG 膠條可以直接放在 IEF 儀器的冷卻板上：① 如果運行時間不超過 12 h ( 經常發生在寬的或中等 pH 范 圍 IPG，如 IPG 3~10 或 4~7 ) 。② 如果 pH 梯
植物蛋白質組學中的雙向電泳技術實驗（一）
試劑、試劑盒?尿素裂解溶液IPG 干膠條水化液IPG 膠條平衡液SDS 凝膠緩沖液電極緩沖液儲液丙烯酰胺 甲叉雙丙烯酰胺溶液過硫酸銨溶液瓊脂糖溶液儀器、耗材?等電聚焦儀 IPGphor多重垂直 SDS 電泳儀實驗步驟 3.1 第一向：在 IPG 膠條中進行等電聚焦（ IPG-IEF)采用 IPG (
蛋白質組的雙向凝膠電泳技術介紹
雙向凝膠電泳技術與質譜技術是目前應用最為廣泛的研究蛋白質組學的方法。雙向凝膠電泳技術利用蛋白質的等電點和分子量差別將各種蛋白質區分開來。雖然二維凝膠電泳難以辨別低豐度蛋白，對操作要求也較高，但其通量高、分辨率和重復性好以及可與質譜聯用的特點，使其成為目前最流行、可靠的蛋白質組研究手段。雙向凝膠電
植物蛋白質組學和糖基化實驗（四）
3.3 我的糖基化蛋白在哪實驗人員可通過這個方法獲得關于糖苷在蛋白骨架上的分布及糖苷本身的結構信息。這類實驗可在純化的糖蛋白或者從 1D 或 2D 電泳膠上分離出來的蛋白上進行，首先，用蛋白內切酶消化蛋白質，通過高效液相色譜（HPLC) 分離消化后的肽和糖肽混合物。對含有糖苷的收集組分進行糖
蛋白質組學研究中的核心技術—雙向凝膠電泳
人類基因組計劃與美國塞萊拉遺傳信息公司于 2001 年在美國《科學》雜志和英國《自然》雜志聯合宣布，他們繪制出了準確、清晰、完整的人類基因組圖譜，至此，人類基因組計劃已基本完成，隨著后基因組時代的到來，蛋白質組學得到了空前的發展，蛋白質組研究旨在揭示基因表達的真正執行生命活動的全部蛋白質的表達規律和
蛋白質組學研究中的核心技術—雙向凝膠電泳
人類基因組計劃與美國塞萊拉遺傳信息公司于 2001 年在美國《科學》雜志和英國《自然》雜志聯合宣布，他們繪制出了準確、清晰、完整的人類基因組圖譜，至此，人類基因組計劃已基本完成，隨著后基因組時代的到來，蛋白質組學得到了空前的發展，蛋白質組研究旨在揭示基因表達的真正執行生命活動的全部蛋白質的