蛋白質一級結構的測定方法（三）
2)酶解法 酶水解法較化學法具有更多的優越性，使用也更廣泛。因其具有較高專一性，而且水解產率較高，所以可以選擇各種不同專一性的酶進行專一性的斷裂。 常用的酶有胰蛋白酶、糜蛋白酶、胃蛋白酶和嗜熱菌蛋白酶。 胰蛋白酶專一斷裂Lys,Arg的羧基側肽鍵，如果對Lys,Arg,CysH進行化學修飾可改變胰蛋白酶的斷裂性質。 (1)賴氨酸的修飾。將Lys用順丁烯二酸酐或甲基順丁烯二酸桿修飾，則胰蛋白酶僅使Arg肽鍵斷裂。 順丁烯衍生物在中性pH下穩定，胰蛋白酶水解僅使Arg鍵斷裂。在酸性條件下順丁烯衍生物可脫去封閉，此時再行胰蛋白酶水解，則得賴氨酸為末端的多肽。下述為蛋白質中的賴氨酸，經順丁烯酰化作用后，被胰蛋白酶水解的例子。 (2)精氨酸的修飾。精氨酸與1，2-和1，3-二羰化合物作用，縮合產物是一雜環化合物，十分穩定。然后胰酶水解僅斷裂賴氨酸殘基末端的肽鍵。 (3)半胱氨酸的修飾。若肽鏈內Lys......閱讀全文
蛋白質一級結構介紹-臨床生化
蛋白質一級結構介紹： 蛋白質的一級結構就是蛋白質多肽鏈中氨基酸殘基的排列順序，也是蛋白質最基本的結構。它是由基因上遺傳密碼的排列順序所決定的。各種氨基酸按遺傳密碼的順序，通過肽鍵連接起來，成為多肽鏈，故肽鍵是蛋白質結構中的主鍵。 迄今已有約一千種左右蛋白質的一級結構被研究確定，如胰島素，胰核糖
蛋白質一級結構介紹-生化檢驗
蛋白質一級結構介紹： 蛋白質的一級結構就是蛋白質多肽鏈中氨基酸殘基的排列順序，也是蛋白質最基本的結構。它是由基因上遺傳密碼的排列順序所決定的。各種氨基酸按遺傳密碼的順序，通過肽鍵連接起來，成為多肽鏈，故肽鍵是蛋白質結構中的主鍵。 迄今已有約一千種左右蛋白質的一級結構被研究確定，如胰島素，胰核糖
蛋白質的一級結構的特點
一級結構是指蛋白質肽鏈中氨基酸的排列順序，也稱為蛋白質的化學結構。它決定了蛋白質的二、三、四級結構。
蛋白質一級結構的測定方法（三）
?? 2)酶解法 酶水解法較化學法具有更多的優越性，使用也更廣泛。因其具有較高專一性，而且水解產率較高，所以可以選擇各種不同專一性的酶進行專一性的斷裂。 常用的酶有胰蛋白酶、糜蛋白酶、胃蛋白酶和嗜熱菌蛋白酶。 胰蛋白酶專一斷裂Lys,Arg的羧基側肽鍵，如果對Lys,Arg,CysH進行化學修
蛋白質一級結構的測定方法（一）
?? 研究蛋白質的一級結構從確定組成蛋白質的單元結構棗氨基酸算起，已有150年的悠久歷史，直到1955年，Sanger首次闡明胰島素的氨基酸排列順序，為研究蛋白質的一級結構開辟了道路。這在分子生物學的發展進程中是一個重要突破。目前關于核酸的一級結構研究，由于Sanger等發明了加減法，可以得到了突
蛋白質一級結構的測定方法（二）
?? 2)末端分析 其方法較多，這里我們只介紹較常用的幾種。 (1)N-末端測定 A.二硝基氟苯法(FDNB，DNFB)：1945年Sanger提出此方法，是他的重要貢獻之一。 DNP-氨基酸用有機溶劑抽提后，通過層析位置可鑒定它是何種氨基酸。Sanger用此方法測定了胰島素的N末端分別為甘
cDNA 法推斷蛋白質的一級結構實驗
一、蛋白質的純化和肽段氨基酸序列分析 二、引物的設計 三、用 PCR 擴增目的 cDNA 片段 四、cDNA 的克隆及測序 五、cDNA 序列的分析及蛋白質一級結構的確定 ? ? ? ?
cDNA 法推斷蛋白質的一級結構實驗
實驗方法原理 將 SDS-PAGE 上的蛋白質樣品從凝膠上分離出來是很困難的，目前流行的方法是將蛋白質電印跡（electrobloting） 至 PVDF 膜上，直接進行序列分析或直接在膜上進行酶解，后者稱為原位分析。實驗材料 蛋白質樣品試劑、試劑盒 PVP-40HAC酶解緩沖液蒸餾水儀器、耗材 E
cDNA 法推斷蛋白質的一級結構實驗3
實驗方法原理PCR（polymerase chain reaction）作為一種常用的分子生物學實驗手段，已非常成熟。各個公司推出了各種高保真和高效率的聚合酶及成套的 PCR 試劑盒，使得 PCR 技術簡便而且有效。實驗步驟1. 方法的選擇：對于兩端序列已知的情況，可根據兩端序列設計引物，選用普通的
cDNA 法推斷蛋白質的一級結構實驗4
實驗材料cDNA試劑、試劑盒載體感受態細菌儀器、耗材核酸自動測序儀實驗步驟1. cDNA 片段與載體進行聯接反應（多在 4℃下進行低溫聯接）；2. 使用兩次 CaCl2?沉淀法制成的感受態細菌（如 DH5a 或 Jm 109 等菌株），進行轉化；3. 結合載體抗生素抗性特點，進行菌落的藍白斑篩選；4