病毒包裝技術5——腺病毒載體的制備介紹
1 菌液的準備 1.1. 取含目的質粒的甘油菌液（-80℃或-20℃冰箱中），待菌液融化后，在超凈臺用接種環劃線于氨芐抗性的平板上，37℃倒置培養12-16h。待平板長出菌落，挑選生長狀態良好的單克隆菌落。若無目的質粒的菌液，則需取庫存質粒進行轉化，然后挑單克隆搖菌。 1.2. 將單克隆接種于5ml氨芐抗性的LB液體培養基中，37℃，220rpm/min，震蕩培養12-16h； 1.3. 將上述的5ml LB菌液分裝到2個2ml離心管中5000g 離心8 min，棄上清（將離心管倒置于紙巾上數分鐘，除盡上清），細菌沉淀待用。 2 腺病毒質粒的抽提（參考AxyPrep? 質粒小抽試劑盒說明書） 2.1 取250ul 已加入RNase A 的Buffer S1 對細菌沉淀進行懸浮，將細菌沉淀吹打需均勻，不應留有小的菌塊。 2.2 取250ul Buffer S2加入到上述菌懸液中，溫和并......閱讀全文
病毒包裝技術5——腺病毒載體的制備介紹
1 菌液的準備 1.1. 取含目的質粒的甘油菌液（-80℃或-20℃冰箱中），待菌液融化后，在超凈臺用接種環劃線于氨芐抗性的平板上，37℃倒置培養12-16h。待平板長出菌落，挑選生長狀態良好的單克隆菌落。若無目的質粒的菌液，則需取庫存質粒進行轉化，然后挑單克隆搖菌。 1.2. 將單
病毒包裝技術——腺病毒載體的制備
1 菌液的準備1.1. 取含目的質粒的甘油菌液（-80℃或-20℃冰箱中），待菌液融化后，在超凈臺用接種環劃線于氨芐抗性的平板上，37℃倒置培養12-16h。待平板長出菌落，挑選生長狀態良好的單克隆菌落。若無目的質粒的菌液，則需取庫存質粒進行轉化，然后挑單克隆搖菌。1.2. 將單克隆接種于5ml氨芐
病毒包裝技術6——腺病毒包裝流程介紹
1. 細胞的準備 a) 復蘇293細胞，傳代培養1-2代，調整好細胞狀態，務必4代以內完成轉染實驗。 b) 在轉染前1天，用胰酶消化傳代，將5×105細胞接種于6孔板或87.5px皿中，加入2ml完全培養基（DMEM+10%FBS+1%P/S+1%Glutamax），搖勻后置于5%
病毒包裝技術——腺病毒包裝流程
1.?細胞的準備a)?復蘇293細胞，傳代培養1-2代，調整好細胞狀態，務必4代以內完成轉染實驗。b)?在轉染前1天，用胰酶消化傳代，將5×105細胞接種于6孔板或87.5px皿中，加入2ml完全培養基（DMEM+10%FBS+1%P/S+1%Glutamax），搖勻后置于5% CO2、95% 濕潤
腺病毒載體疫苗的制備與分離
通常來說，開發一種新型疫苗需要經過數年的艱苦過程，包括完整的生產工藝確定。這樣的模式沒辦法對一些爆發性的傳染疾病做出快速響應，而且面對一些商業潛力比較小的區域性疾病或者是某些定制化疫苗也是力有不逮。?在病毒載體家族里面，腺病毒的應用非常廣泛，它具有誘導抗體和T細胞組合反應的潛能。雖然人群中廣泛存在的
腺病毒載體的分類介紹
第一代腺病毒載體：一般將E1或E3基因缺失的腺病毒載體稱為第一代腺病毒載體，此類型載體在未經過純化時可引發機體產生較強的炎癥反應和免疫反應，純化后可以安全使用，體內表達周期可達4周。 第二代腺病毒載體：E2A或E4基因缺失的腺病毒載體被稱為第二代腺病毒載體，產生的免疫反應較弱其載體容量和安全性
腺病毒載體的應用優勢介紹
腺病毒載體轉基因效率高，體外實驗通常接近100%的轉導效率；可轉導不同類型的人組織細胞，不受靶細胞是否為分裂細胞所限；容易制得高滴度病毒載體，在細胞培養物中重組病毒滴度可達（10E+11）/ml；進入細胞內并不整合到宿主細胞基因組，僅瞬間表達，安全性高。因而，腺病毒載體在基因治療臨床試驗方面有了
病毒包裝技術1——病毒與非病毒載體介紹
基于轉化醫學的研究理念，銳賽知道，每一項臨床疾病的致病源頭或表象最初都是由個體體內某個基因的突變導致了。所以每一項臨床疾病的研究，整體課題項目開展的最初源頭也必須從一個基因開始。 銳賽在多年的轉化醫學研究中，在于各個臨床醫師的整體項目合作中，探討得出的不僅是轉化醫學臨床研究課題的整體思路，
腺病毒載體綜述
腺病毒的一般特性??? 腺病毒的形態是特征性的二十面體病毒殼體（Stewart et al., 1993）。其病毒殼體含有三種主要的蛋白：六鄰體（II），五鄰體基底（III）和纖突（IV），還有多種其他的輔助蛋白VI，VIII，IX，IIIa和Iva2（Fig. 1）。腺病毒基因組是一個線性的雙鏈D
腺病毒載體的分類
第一代腺病毒載體：一般將E1或E3基因缺失的腺病毒載體稱為第一代腺病毒載體，此類型載體在未經過純化時可引發機體產生較強的炎癥反應和免疫反應，純化后可以安全使用，體內表達周期可達4周。第二代腺病毒載體：E2A或E4基因缺失的腺病毒載體被稱為第二代腺病毒載體，產生的免疫反應較弱其載體容量和安全性方面有所