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    cDNA文庫組標準流程2

    (二)動物組織totalRNA的提取 1.根據表1選擇適當的組織量和相應的變性裂解液量,將變性裂解液分裝到RNase-free的50ml無菌離心管中,冰浴5分鐘。 2.將組織樣品放入變性裂解液中,在高速下勻漿15-30秒/次,直到看不見組織和細胞碎片。 3.根據表1加入適量2M的乙酸鈉(pH4.0),反復顛倒混勻4-5次。 4.根據表1加入適量酚/氯仿,加蓋顛倒混合4-5次,再搖動10秒鐘。 5.冰浴10分鐘。 6.4℃,12000g離心20分鐘。 7.小心轉移上層水相于另一個RNase-free的無菌離心管中,內含所需的RNA。蛋白質和DNA分別留在了有機相和中間層。 8.加入等體積的異丙醇,-20℃沉淀 30分鐘以上。 9.4℃,12000g離心20分鐘。 10.根據表1加入適量的變性裂解液重新溶解RNA。 11.加等體積的氯仿,加蓋顛倒混合4-5次,再搖動10秒鐘。 12.4℃,12000g離心20分鐘。 13.小心轉移上......閱讀全文

    轉錄組高通量測序

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