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    避免RNA酶污染的方法

    RNase酶非常穩定,是導致RNA降解最主要的物質。它在一些極端的條件可以暫時失活,但限制因素去除后又迅速復性。用常規的高溫高壓蒸氣滅菌方法和蛋白抑制劑不能使所有的RNase完全失活。為了獲得高質量的真核細胞mRNA,必須使用RNA酶的抑制劑或采用下述的破碎細胞和滅活RNA酶同步進行的方法,最大限度地降低細胞破碎過程中所釋放的RNA酶的活性。同時,避免偶然引入實驗室內其他潛在的痕量RNA酶也很重要。下面列舉避免RNA酶污染問題的一些注意事項。大多數有經驗的研究者并不拘泥于這些注意事項,只是在遇到問題時可能采用其中的一種或幾種方法加以解決。我們謹將下述內容作為解決RNA酶污染問題的實驗指南。 1.塑料制品:盡可能使用無菌、一次性塑料制品。已標明RNase-free的塑料制品,如沒有開封使用過,通常沒有必要再次處理。對于國產塑料制品,有些廠家提供的產品已達到RNase-free,可以直接使用,再次處理容易造成二次污染,得不償失。......閱讀全文

    避免RNA酶污染的方法

    RNase酶非常穩定,是導致RNA降解最主要的物質。它在一些極端的條件可以暫時失活,但限制因素去除后又迅速復性。用常規的高溫高壓蒸氣滅菌方法和蛋白抑制劑不能使所有的RNase完全失活。為了獲得高質量的真核細胞mRNA,必須使用RNA酶的抑制劑或采用下述的破碎細胞和滅活RNA酶同步進行的方法,最大限度

    防止RNA酶污染方法

    防止RNA酶污染的措施1. 所有的玻璃器皿均應在使用前于180℃的高溫下干烤6hr或更長時間。2. 塑料器皿可用0.1% DEPC水浸泡或用氯仿沖洗(注意:有機玻璃器具因可被氯仿腐蝕,故不能使用)。3. 有機玻璃的電泳槽等,可先用去污劑洗滌,雙蒸水沖洗,乙醇干燥,再浸泡在3% H2O2 室溫10mi

    避免RNA降解的方法有哪些?

    (1)在用來驗證完整性之前先在變性膠上分析RNA。(2)運用良好無污染的技術分離RNA(3)將組織提取后立刻提取RNA,并將提取好的RNA反轉錄為cDNA進行低溫保存。

    防止RNA酶污染的措施

    在所有RNA實驗中,最關鍵的因素是分離得到全長的RNA。而實驗失敗的主要原因是核糖核酸酶(RNA酶)的污染。由于RNA酶廣泛存在而穩定,一般反應不需要輔助因子。因而RNA制劑中只要存在少量的RNA酶就會引起RNA在制備與分析過程中的降解,而所制備的RNA的純度和完整性又可直接影響RNA分析的結果,所

    如何防止RNA酶污染

    在所有RNA實驗中,最關鍵的因素是分離得到全長的RNA。而實驗失敗的主要原因是核糖核酸酶(RNA酶)的污染。由于RNA酶廣泛存在而穩定,一般反應不需要輔助因子。因而RNA制劑中只要存在少量的RNA酶就會引起RNA在制備與分析過程中的降解,而所制備的RNA的純度和完整性又可直接影響RNA分析的結果,所

    RNA酶污染的預防措施

    RNA的的化學性質比DNA活躍得多。RNA分子上緊鄰磷酸二脂鍵的2′羥基基團能直接被RNA酶利用來作為活性因子,從而使得RNases無需金屬離子就能發揮活性。由于RNA酶在環境中廣泛存在,特別是RNase A,結構極其穩定,不能通過高溫高壓滅菌失活,因而極難消除,對保持RNA樣品的完整性構成極大

    怎么樣在RNA提取時避免基因組的污染

    260/280的比值可以判斷比較嚴重的基因組污染。也可以通過跑瓊脂糖膠看加樣孔里亮不亮作為一個參考依據。其實一般很難保證RNA沒有基因組污染的,特別是加入氯仿后的劇烈震蕩會促進dna溶解到水相里,后面就很難分離了。有些許的基因組污染的樣品也能夠滿足大部分的實驗要求。所以在rt-pcr等試驗中才要求設

    簡易且能避免污染的細胞培養方法

    培養細胞常規方法需用二氧化碳溫箱,且為保持箱內二氧化碳氣5%~10%的濃度,需持續輸入二氧化碳氣體。為此,箱內的培養瓶蓋不能擰緊以便二氧化碳氣體自由進出。*步,配制1L培養液。培養基中含有酚紅指示劑,偏堿時液體為深紅或紫色,偏酸時則呈黃色。取配1L培養液的粉劑培養基,加入750ml三蒸水或去離子水,

    RNA酶保護試驗方法

    RNA酶保護法是近十年發展起來的一種全新的mRNA定量分析方法。其基本原理是將標記的特異RNA探針(32P或生物素)與待測的RNA樣品液相雜交,標記的特異RNA探針按堿基互補的原則與目的基因特異性結合,形成雙鏈RNA;未結合的單鏈RNA經RNA酶A或RNA酶T1消化形成寡核糖核酸,而待測目的基因與特

    怎樣避免角蛋白的污染?

    常見的角蛋白有四種,主要是從皮膚屑(直接接觸)和頭皮屑(空氣傳播)中來的。質譜中 檢測到的角蛋白峰應該是在酶解前就進入樣品中來的(主要是在染膠,脫色,切膠和加酶這四步)。試驗中一定要佩戴手套;一定要仔細清洗染膠的容器(先用 70 %酒精洗,再用去離子水洗);切膠要帶口罩,并在通風櫥中進行

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