反義技術——RNA干擾（RNAinterference，RNAi）
最近由于RNA干擾（RNA interference，RNAi）的發現使反義領域的研究增多。這種自然發生的現象最早是在秀麗線蟲中發現的（1），是序列特異性地使轉錄后的基因沉默的有力機制。由于最近兩年在RNAi領域取得的進步，已經有許多這方面的綜述發表（2-4）。RNA干擾是由長的雙鏈 RNA分子發動的，該分子可以被Dicer enzyme加工成長度為21-23個核苷酸的RNA（見圖）。RNaseIII蛋白被認為是作為一個二聚體發揮作用，它對雙鏈RNA的兩個鏈都進行切割，酶切的產物3’末端互相重疊。然后這種小的干擾RNA分子（small interfering RNAs，siRNAs）摻入RNA誘導的沉默復合物（RNA- induced silencing complex，RISC），引導核酸酶降解靶RNA。 這種保守的生化機制可用于研究多種模式生物的基因功能，但是它在哺乳動物細胞中的應用受到阻礙，因為長的......閱讀全文
RNA干擾回復實驗
RNA干擾回復實驗，主要是為了說明Off-target效應。Off-target效應Off-target effects（脫靶效應）最早由Dharmacon科學家Jackson和他的同事們提出（Fedorov,Y.,et al. "Off-targeting By siRNA Can Induce
RNA干擾的概念
RNA干擾（RNA interference，RNAi）是指在進化過程中高度保守的、由雙鏈RNA（double-stranded RNA，dsRNA）誘發的、同源mRNA高效特異性降解的現象。基因沉默，主要有轉錄前水平的基因沉默(TGS)和轉錄后水平的基因沉默(PTGS)兩類：TGS是指由于DNA修
RNA干擾相關知識RNARISC
RNA-induced silencing complex（RISC）：一種RNA-蛋白質復合物，通過與目標mRNA完全或者部分的互補配對來實施切割或者翻譯抑制功能。SiRNA組裝siRISC，miRNA組裝miRISC。RISCs（無論siRISC還是miRISC）包括兩種類型：切割型和不切割型。
RNA干擾相關知識RNARITS）
RNA-induced initiation of transcriptional gene silencing（RITS）：是一種組織染色質變型的復合物。RITS復合物也包含Dicer加工形成的siRNA和AGO蛋白質，通過結合到異染色質的基因池上來促使異染色質上基因的沉默。
反義RNA調控細菌基因的表達功能介紹
反義RNA對編碼CAP的基因的調控作用已如前述。這里再介紹一下micF RNA對ompF基因的表達的調控。ompF蛋白質是大腸桿菌的外膜蛋白的主要成分這一。micF RNA是從另一基因(ompC基因)附近的DNA序列轉錄而來，和o-mpFn RNA的5'端有70%的序列互補，因此在體外m
關于反義RNA的人工合成的介紹
既然反義RNA在原核生物中對基因表達起著重要的調控作用，那么人工設計在天然狀態下不存在的反義RNA來調節靶基因的表達，想必也是可能的。這已在不少實驗中得到證實。 1.由于對靶mRNA的SD序列的上游區的結構了解甚少，因此，在要設計Ⅱ類反義RNA用于和靶mRNASD序列上游區結合，以期達到調節該
反義RNA的調控細菌基因的表達功能
反義RNA對編碼CAP的基因的調控作用已如前述。這里再介紹一下micF RNA對ompF基因的表達的調控。ompF蛋白質是大腸桿菌的外膜蛋白的主要成分這一。micF RNA是從另一基因(ompC基因)附近的DNA序列轉錄而來，和o-mpFn RNA的5'端有70%的序列互補，因此在體外mic
PNAS：研究反義RNA的一條捷徑
雙鏈DNA在轉錄過程中打開，其中一條鏈生成作為蛋白翻譯模板的信使RNA。偶爾，另一條DNA也能產生一個反義的RNA分子(asRNA)，這種反義RNA的序列與信使RNA互補。許多細胞中都存在這樣的asRNA，但人們并不了解這些分子有何功能。近日，科學家們開發了一個分離和鑒定反義RNA的新
反義DNA技術的應用
反義DNA 被廣泛地應用于反義技術中用以“封閉”或“抑制”目的基因表達，被應用的反義DNA多采用化學合成法得到，長度一般在8～28bp，1978年Zamecnik首次利用13bp的反義DNA抑制勞氏肉瘤病毒(RSV)增殖。為了提高半衰期對天然結構反義DNA片斷的加工和修飾也應運而生，相繼出現了甲基磷
反義DNA的技術介紹
隨著分子生物學和遺傳工程的發展，基因治療應運而生，反義技術是其中一種，它的基礎是根據核酸雜交原理設計針對特定靶序列的反義核酸，從而抑制特定基因的表達，包括反義RNA、反義DNA及核酶（Ribozyme），它們通過人工合成和生物合成獲得。反義DNA是指一段能與特定的DNA或RNA以堿基互補配對的方式結
RNA干擾技術在植物學中的應用
Napoli等將1個查爾酮合成酶基因（chs）置于1個強啟動子后導人矮牽牛（Petunia hybrida），試圖加深花朵的紫顏色。結果部分花的顏色并非期待中的深紫色，而是形成了花斑狀甚至白色，而且這種性狀可以遺傳。因為導入的基因和其同源的內源基因同時都被抑制，他們將這種現象命名為共抑制（co-
關于小干擾RNA的RNA激活介紹
已經發現dsRNA還可以激活基因表達，這種機制被稱為“小RNA誘導的基因激活”或RNAa。已經顯示靶向基因啟動子的dsRNA誘導相關基因的有效轉錄激活。使用合成的dsRNA在人細胞中證明RNAa，稱為“小活化RNA”（saRNA）。尚不清楚RNAa是否在其他生物體中是保守的。
RNA干擾相關知識Small－interfering－RNA（siRNA）
Small interfering RNA（siRNA）：是一種小RNA分子（~21-25核苷酸），由Dicer（RNAase Ⅲ家族中對雙鏈RNA具有特異性的酶）加工而成。SiRNA是siRISC的主要成員，激發與之互補的目標mRNA的沉默。
RNA干擾的發現背景
RNAi是在研究秀麗新小桿線蟲（C. elegans）反義RNA（antisense RNA）的過程中發現的，由dsRNA介導的同源RNA降解過程。1995年，Guo等發現注射正義RNA（sense RNA）和反義RNA均能有效并特異性地抑制秀麗新小桿線蟲par-1基因的表達，該結果不能使用反義RN
RNA干擾的作用機制
病毒基因、人工轉入基因、轉座子等外源性基因隨機整合到宿主細胞基因組內，并利用宿主細胞進行轉錄時，常產生一些dsRNA。宿主細胞對這些dsRNA迅即產生反應，其胞質中的核酸內切酶Dicer將dsRNA切割成多個具有特定長度和結構的小片段RNA（大約21～23 bp），即siRNA。siRNA在細胞內R
RNA干擾主體實驗介紹
siRNA表達載體構建好后，即可進行RNA干擾主體實驗。RNA干擾主體實驗的重點在于：成功將siRNA表達載體導入目的細胞如果目的細胞的質粒轉染效率較低（低于70%），則應采用腺病毒或慢病毒載體，利用病毒載體的高感染率、高表達特性，更好地開展RNA干擾主體實驗。設置好分組和對照按照nature的標準
RNA干擾相關知識Microprocessor
Microprocessor：一種核內的復合物，主要由Drosha和Pasha兩者組成，在miRNA的生物合成中促使原始的miRNA成為miRNA前體。
RNA干擾相關知識Slicer
Slicer：在切割型RISC中的內切酶的另外一種表述方法。
簡述RNA干擾的特征
①RNAi是轉錄后水平的基因沉默機制； ②RNAi具有很高的特異性，只降解與之序列相應的單個內源基因的mRNA； ③RNAi抑制基因表達具有很高的效率，表型可以達到缺失突變體表型的程度，而且相對很少量的dsRNA分子（數量遠遠少于內源mRNA的數量）就能完全抑制相應基因的表達，是以催化放大的
概述RNA干擾的特點
1.高效性：Elbashir等在研究中發現分別為25 nmol/L與100 nmol/L的起始雙鏈RNA產生的結果是一樣的，只是高濃度起始的更有效些。將雙鏈RNA濃度降低到1.5 nmol/L時產生的基因沉默效果變化不大，只有當濃度降低到0.05 nmol/L時，沉默的效果才消失。Holen等也
RNA干擾現象的概念
RNA干擾（RNA interference，RNAi）是指在進化過程中高度保守的、由雙鏈RNA（double-stranded RNA，dsRNA）誘發的、同源mRNA高效特異性降解的現象。
RNA干擾主體實驗介紹
siRNA表達載體構建好后，即可進行RNA干擾主體實驗。RNA干擾主體實驗的重點在于：成功將siRNA表達載體導入目的細胞如果目的細胞的質粒轉染效率較低（低于70%），則應采用腺病毒或慢病毒載體，利用病毒載體的高感染率、高表達特性，更好地開展RNA干擾主體實驗。設置好分組和對照按照nature的標準
RNA干擾回復實驗介紹
RNA干擾回復實驗，主要是為了說明Off-target效應。Off-target效應Off-target effects（脫靶效應）最早由Dharmacon科學家Jackson和他的同事們提出（Fedorov,Y.,et al. "Off-targeting By siRNA Can Induce
RNA干擾主體實驗介紹
siRNA表達載體構建好后，即可進行RNA干擾主體實驗。RNA干擾主體實驗的重點在于：成功將siRNA表達載體導入目的細胞如果目的細胞的質粒轉染效率較低（低于70%），則應采用腺病毒或慢病毒載體，利用病毒載體的高感染率、高表達特性，更好地開展RNA干擾主體實驗。設置好分組和對照按照nature的標準
RNA干擾的作用機制
病毒基因、人工轉入基因、轉座子等外源性基因隨機整合到宿主細胞基因組內，并利用宿主細胞進行轉錄時，常產生一些dsRNA。宿主細胞對這些dsRNA迅即產生反應，其胞質中的核酸內切酶Dicer將dsRNA切割成多個具有特定長度和結構的小片段RNA（大約21～23 bp），即siRNA。siRNA在細胞內R
RNA干擾現象的特點
1.高效性：Elbashir等在研究中發現分別為25 nmol/L與100 nmol/L的起始雙鏈RNA產生的結果是一樣的，只是高濃度起始的更有效些。將雙鏈RNA濃度降低到1.5 nmol/L時產生的基因沉默效果變化不大，只有當濃度降低到0.05 nmol/L時，沉默的效果才消失。Holen等也證實
RNA干擾的作用機制
病毒基因、人工轉入基因、轉座子等外源性基因隨機整合到宿主細胞基因組內，并利用宿主細胞進行轉錄時，常產生一些dsRNA。宿主細胞對這些dsRNA迅即產生反應，其胞質中的核酸內切酶Dicer將dsRNA切割成多個具有特定長度和結構的小片段RNA（大約21～23 bp），即siRNA。siRNA在細胞內R
細胞化學詞匯RNA干擾
中文名稱：RNA干擾外文名稱：RNA interference定?????? 義：RNA干擾（RNA interference，RNAi）是指在進化過程中高度保守的、由雙鏈RNA（double-stranded RNA，dsRNA）誘發的、同源mRNA高效特異性降解的現象。分?????? 類：基因沉
Nature里程碑研究：新型非編碼反義RNA
在研究帕金森氏病的過程中，一個國際研究小組獲得了一個可以提高工業蛋白質合成用于治療用途的新發現。他們設法了解了非蛋白質編碼RNA的一個新功能：借助這類稱作“反義”的非編碼RNA的活性可以提高編碼基因的蛋白質合成活性。相關成果發表在10月14日的《自然》(Nature)雜志上。 為了合成蛋白
RNA干擾（RNA－interference，RNAi）基礎知識(1)
Rnai最近由于RNA 干擾（RNA interference，RNA i）的發現使反義領域的研究增多。這種自然發生的現象最早是在秀麗線蟲中發現的（1），是序列特異性地使轉錄后的基因沉默的有力機制。由于最近兩年在 RNA i領域取得的進步，已經有許多這方面的綜述發表（2-4）。RNA 干擾是