靶細胞殺傷實驗總論2
2、流式細胞標記法 （1）PE-mAb/FITC-annexin V 熒光標記法 正常細胞的磷酯酰絲氨（phosphatidylserine，PS）位于細胞膜內表面，細胞凋亡時翻轉露于膜外側，可與annexinV高親合力結合。研究發現PS外翻為細胞凋亡的早期事件，先于膜通透性增加所51Cr或其他染料的釋放。將效應細胞與靶細胞充分共育后，用PE結合的效應細胞特異性單克隆抗體（如CD8-PE）標記效應細胞（不能與PE-mABA結合的細胞即為靶細胞），再用FITC- annexin V標記凋亡靶細胞，用流式細胞儀區分并定量此三類不同的細胞群，即可計算出效應細胞殺傷靶細胞百分數。 本法的優點 ①簡單快捷，無需預標記，直接將上二試劑加入測定管即可； ②與51Cr法相關性好（r=0.989），在早期時段更為靈敏，還可在進行分析，尤其適用于動力學分析； ③可允許E與T長時間共育，......閱讀全文
靶細胞殺傷實驗總論 2
2、流式細胞標記法?（1）PE-mAb/FITC-annexin V 熒光標記法?正常細胞的磷酯酰絲氨（phosphatidylserine，PS）位于細胞膜內表面，細胞凋亡時翻轉露于膜外側，可與annexinV高親合力結合。研究發現PS外翻為細胞凋亡的早期事件，先于膜通透性增加所51Cr或其他染料
靶細胞殺傷實驗總論 1
細胞介導的免疫反應（cell mediated immune， CMI）在機體抗感染及抗腫瘤免疫、移植排斥反應和自身免疫病中發揮重要的作用。CMI的主要效應細胞之一為細胞毒T淋細胞（cytotoxic T lymphocyte，CTL）。目前在醫學基礎與臨床研究中重視CTL活性測定，將其作為
靶細胞殺傷實驗：LDH法
一、效應細胞的制備 激惹5天后，于無菌條件下取出受鼠引流的腹股溝淋巴結，100目鋼網研磨，調整細胞濃度為2×107.ml-1。臺盼藍色要求存活率>95%。 二、靶細胞的制備 P815細胞株系DBA/2小鼠的肥大細胞瘤細胞株。連續傳代培養，調整細胞濃度為2×105/ml或3.33×1
靶細胞殺傷實驗：AnnexiV標記法
正常細胞的磷酯酰絲氨（phosphatidylserine，PS）位于細胞膜內表面，細胞凋亡時翻轉露于膜外側，可與annexinV高親合力結合。研究發現PS外翻為細胞凋亡的早期事件，先于膜通透性增加所51Cr或其他染料的釋放。將效應細胞與靶細胞充分共育后，用PE結合的效應細胞特異性單克隆抗體（如CD
靶細胞殺傷實驗：CFSE/PI法
做免疫學特別是腫瘤學實驗，總免不了要測淋巴細胞或其他細胞對腫瘤細胞的殺傷，老外最常用的是Cr51放射實驗，但這個方法在國內的不少地方都不能做，而MTT這個方法又太老了，而且也不準確，那么替代方法就用流式細胞術，又方便，又準確。1、計數靶細胞，并加入CFSE，使CFSE終濃度達到2uM，37度30分鐘
靶細胞殺傷實驗：CFSE/PI法
做免疫學特別是腫瘤學實驗，總免不了要測淋巴細胞或其他細胞對腫瘤細胞的殺傷，老外最常用的是Cr51放射實驗，但這個方法在國內的不少地方都不能做，而MTT這個方法又太老了，而且也不準確，那么替代方法就用流式細胞術，又方便，又準確。 1、計數靶細胞，并加入CFSE，使CFSE終濃度達到2u
靶細胞殺傷實驗：Cr51法
一、原理?用Na2 51 CrO 4 標記靶細胞，若待檢效應細胞能殺傷靶細胞，則51 Cr( 鉻) 從靶細胞內釋出。以γ計數儀測定釋出的51 Cr 放射活性，靶細胞溶解破壞越多，51 Cr 釋放就越多，上清液的放射活性也就越高，應用公式可計算出待檢效應細胞的殺傷活性。?二、步驟?（以CTL殺傷腫
殺傷靶細胞的過程
CTL殺傷靶細胞是一個連續過程，可分為三個階段，主要研究內容如下：1、效應靶細胞結合：CTL是通過其膜上的受體TCR，即Ti-CD3分子與靶細胞結合，此時膜上的淋巴細胞功能相關抗原Ⅰ與靶細胞膜上的配基Ⅰ，又稱細胞內粘附分子相互作用，即靶細胞與效應細胞初步接觸。此時親和力低，為非特異性的，但可促使TC
靶細胞殺傷實驗：MTT和CCK8比較
Cell Counting Kit-8簡稱CCK-8試劑盒，是一種基于WST-8的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。?WST-8是一種類似于MTT的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內的一些脫氫酶還原生成橙黃色的formazan。細胞增殖越多越快，則顏色越深；細胞毒
流式細胞術測效靶細胞殺傷實驗
做免疫學特別是腫瘤學實驗，總免不了要測淋巴細胞或其他細胞對腫瘤細胞的殺傷，老外最常用的是Cr51放射實驗，但這個方法在國內的不少地方都不能做，而MTT這個方法又太老了，而且也不準確，那么替代方法就用流式細胞術，又方便，又準確，這也是偶參照老外的方法吧。1 計數靶細胞，并加入CFSE，使CFSE終濃度