雜交瘤技術基本程序與方法5
下面簡要介紹幾種常用的抗體檢測方法 （1）免疫酶技術 免疫酶技術是將抗原抗體反應的特異性和酶對底物顯色反應的高效催化作用有機結合而成的免疫學技術。由于它特異性強，靈敏度高，現已廣泛用于篩選和鑒定單抗。 ①器材和試劑 a、包被緩沖液： 碳酸鹽緩沖液：取0.2mol/L Na2CO3 8ml，0.2mol/L NaHCO3 17ml混合，再加75ml蒸餾水，調PH至9.6。 Tris-HCl緩沖液（PH8.0，0.02mol/L）：取0.1mol/L Tris 100ml，0.1mol/L HCl 58.4ml混合，加蒸餾水至1000ml。 b、洗滌緩沖液（PH7.2的PBS）：KH2PO4 0.2g，KCl 0.2g，Na2HPO4?12H2O 2.9g，NaCl 8.0g，Tween-20 0.5ml，加蒸餾水至1000ml。 c、稀釋液和封閉液：牛......閱讀全文
雜交瘤技術原理
單克隆是指利用在細胞融合基礎上的B細胞雜交瘤技術。??????? 雜交瘤技術的基本原理是通過融合兩種細胞而同時保持兩者的主要特征。這兩種細胞分別是經抗原免疫的小鼠脾細胞和小鼠骨髓瘤細胞。被特異性抗原免疫的小鼠脾細胞（B淋巴細胞）的主要特征是它的抗體分泌功能，但不能在體外連續培養，小鼠骨髓瘤細胞則可在
細胞雜交瘤技術
細胞雜交瘤技術?雜交瘤技術?雜交瘤技術是1975年Kohler和Milstein用于制備單克隆抗體而創建的一項重要技術，被譽為“免疫學上的一次革命”。此技術被廣泛用于各種單克隆抗體的制備。抗體是由B淋巴細胞分泌的，一個B淋巴細胞只能分泌一種抗體。把B淋巴細胞和骨髓細胞融合，即可形成在體外長期存活并分
雜交瘤細胞技術分析
雜交瘤細胞技術分析克隆化的細胞可以在體外進行大量培養，收集上清液而獲得大量的單一的克隆化抗體。不過體外培養法得到的單克隆抗體有限，其不能超過特定的細胞濃度，且每天要換培養液。而體內雜交瘤細胞繁殖可以克服這些限制。雜交瘤細胞具有從親代淋巴細胞得來的腫瘤細胞的遺傳特性。如接種到組織相容性的同系小鼠或不能
關于雜交瘤技術的應用介紹
單克隆抗體不僅在生物學和免疫學基礎研究中具有重要的價值，而且在實踐中的應用范圍亦極為廣泛。在醫學中，單克隆抗體已用于疾病的診斷，其優點是診斷準確，無交叉反應。例如，單克隆抗體診斷乙型肝炎及潛伏的乙型肝炎病毒，則很少發生假陰性的漏診。單克隆抗體還可作為治療疾病的藥物載體。單克隆抗體對靶組織有專一親
關于雜交瘤技術的基本介紹
雜交瘤技術（hybridoma technique） 即淋巴細胞雜交瘤技術，又稱單克隆抗體技術。它是在體細胞融合技術基礎上發展起來的。克勒（Kohler）和米爾斯坦（Milstein）（1975）證明，骨髓瘤細胞與免疫的動物脾細胞融合，形成能分泌針對該抗原的均質的高特異性的抗體——單克隆抗體，
簡述雜交瘤技術的產生背景
科勒和米爾斯廷于1975年發明了淋巴細胞雜交瘤技術，終于使制備純一抗體的難題獲得了解決。雜交瘤技術是由細胞融合技術發展而來。抗體是由免疫的B淋巴細胞分泌的球蛋白，各個淋巴細胞分泌的抗體各不相同。因而，要獲得一種純一的抗體只有從一個B淋巴細胞產生的細胞群制取。然而，B淋巴細胞在體外不能長期存活，分
雜交瘤技術基本程序與方法-6
③全菌抗原的ELISAS?a、新鮮培養的細菌用蒸餾水或PBS懸浮，并調整細菌濃度至1×108個/ml。必須指出，對于人畜共患病病原體需注意安全操作，最好是滅活處理。?b、每孔中加100ul 5%戊二醛溶液（0.1mol/L NaHCO3 95ml+25%戊二醛溶液5ml），37℃作用2小時，蒸餾水洗
雜交瘤技術基本程序與方法-3
⑥7.5% NaHCO3溶液?稱取分析純NaHCO3 7.5g，溶于100ml超純水或四蒸水中，過濾除菌，分裝小瓶（4-5ml/瓶），蓋緊瓶塞，4℃保存。?⑦HEPES溶液（1mol/L）?稱取23.83g HEPES（N-2-Hydroxyethylpiperazine-N，-2-ethanesu
雜交瘤技術基本程序與方法-8
（3）間接血凝試驗?間接血凝試驗又稱被動血凝試驗（PHA），是目前應用較廣的檢測方法之一。本試驗是以包被可溶性抗原的紅細胞作為指示系統，當被檢抗體與包被在紅細胞上的抗原產生特異性反應時，導致紅細胞呈凝集現象。可見，該法具有靈敏、快速、容易操作和無需昂貴儀器等優點，而且經改用醛化紅細胞以后，克服原來重
雜交瘤技術基本程序與方法-5
下面簡要介紹幾種常用的抗體檢測方法?（1）免疫酶技術?免疫酶技術是將抗原抗體反應的特異性和酶對底物顯色反應的高效催化作用有機結合而成的免疫學技術。由于它特異性強，靈敏度高，現已廣泛用于篩選和鑒定單抗。?①器材和試劑?a、包被緩沖液：?碳酸鹽緩沖液：取0.2mol/L Na2CO3 8ml，0.2mo