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培養細胞的老師們都知道細胞的生命是極其脆弱的在培養過程中有哪些行為是比較傷害細胞的呢？在培養貼壁細胞過程中消化過程在一定程度上是對細胞的一種折磨但是又不得不進行這個過程所以如何做好細胞消化善待細胞們是我們一定要了解的步驟~ 胰酶的作用原理胰酶是一種蛋白酶，酶切位點是肽鏈的Lys或Arg兩個殘基的羧基端肽鏈，通過在特定位置上降解蛋白，使細胞膜上和培養皿結合處蛋白降解，從而使兩者分離。這時細胞由于自身內部細胞骨架的張力以及培養液表面張力的作用下成為球形。 使用胰酶時需注意的細節問題在使用胰酶（Trypsins）細胞消化液的過程中要特別注意避免消化液被細菌污染。胰酶細胞消化液消化細胞時間不宜過長，否則細胞鋪板后生長狀況會較差，做流式時的CD Marker也可能會下降。胰酶進行分裝時盡量分裝成多瓶，并遵守3次左右用完和只裝2/3體積的原則。因為冷凍保存時液體體積會膨脹，多次使用同一瓶胰酶反復凍融會降低消化效果并可能造......閱讀全文
培養細胞的老師們都知道細胞的生命是極其脆弱的在培養過程中有哪些行為是比較傷害細胞的呢？在培養貼壁細胞過程中消化過程在一定程度上是對細胞的一種折磨但是又不得不進行這個過程所以如何做好細胞消化善待細胞們是我們一定要了解的步驟~ 胰酶的作用原理胰酶是一種蛋白酶，酶切位點是肽鏈的Lys或Arg兩個
適用于，無師兄、師姐、非細心、單獨開展細胞培養的實驗者對一般細胞 0.25% 胰酶(胰蛋白酶，Trypsin)配方：100ml PBS,0.25g胰酶步驟：1先配100mlPBS(1000mlPBS:8.0gNaCl,3.4785gPO4HNa2·12H2O/2.9gPO4HNa2 ,0.2gKCl
細胞傳代消化時所用胰酶濃度越高越好嗎？不見得！因為胰蛋白酶溶液的消化能力是和溶液的pH、溫度、胰酶濃度及溶液中是否含有Ca++, Mg++離子和血清等因素有關。通常情況下，pH 8.0 , 溫度 37 oC 其作用能力最強。另外，
細胞原代培養可以：（1）為研究生物體細胞的生長、代謝、繁殖提供有力的手段；（2）為傳代培養創造條件；（3）服務于臨床實踐，用于藥物篩選等。實驗方法原理將動物機體的各種組織從機體中取出，經各種酶（常用胰蛋白酶）、螯合劑（常用EDTA）或機械方法處理，分散成單細胞，置合適的培養基中培養，使細胞得以生存、
一、原理與目的提取制備酶的經典方法，多采用硫酸銨分級沉淀，胰酶在75%飽和度硫酸銨中沉淀，其它雜蛋白一般在10%硫酸銨飽和度下被沉淀而除去。經此多次提取，最后在PH8.0硼酸緩沖液中得到結晶。胰酶在PH3.0時最穩定，可在低溫下儲存較長的時間而不失活；低與此PH酶易變性；高于PH5時，酶易自溶而失活
小鼠肝細胞原代培養可用于：（1）用于細胞保種；（2）用于分子生物學研究；（3）用于基因治療研究。實驗方法原理將小鼠的肝細胞從機體中取出，經胰酶、螯合劑（常用EDTA）處理，分散成單細胞，置合適的培養基中培養，使細胞得以生存、生長和繁殖。 實驗材料小鼠試劑、試劑盒DMEM無血清DMEM培養基
一般說來，胰酶消化時間過長，對細胞會造成損傷，影響其活力，甚至細胞破碎。如果胰酶消化時間過長，就要注意在加入胰酶消化前先用PBS沖洗一下培養瓶，這樣可提高胰酶消化能力，縮短消化時間；另外，可以在配制胰酶時加入EDTA，這樣就更易消化細胞。如果細胞長久不貼壁，可試用下面的方法：1、將細胞接種到培養后，
不見得！因為胰蛋白酶溶液的消化能力是和溶液的pH、溫度、胰酶濃度及溶液中是否含有Ca2+, Mg2+和血清等因素有關。通常情況下，pH 8.0 , 溫度 37 ℃ 其作用能力最強。另外，鈣、鎂離子及血清均能大大降低其消化能力。我們每次進行傳代
不見得！因為胰蛋白酶溶液的消化能力是和溶液的pH、溫度、胰酶濃度及溶液中是否含有Ca++, Mg++離子和血清等因素有關。通常情況下，pH 8.0 , 溫度 37 oC 其作用能力最強。另外，鈣、鎂離子及血清均能大大降低其消化能力。我們每次進行傳代消化前，一定要用D-Hanks液或PBS液反
不見得！因為胰蛋白酶溶液的消化能力是和溶液的pH、溫度、胰酶濃度及溶液中是否含有Ca++, Mg++離子和血清等因素有關。通常情況下，pH 8.0 , 溫度 37 oC 其作用能力最強。另外，鈣、鎂離子及血清均能大大降低其消化能力。我們每次進行傳代消化前，一定要用D-Hanks液或PBS液反