WIKI資訊
你降低引物濃度，增加模版濃度，做一個梯度PCR試試......閱讀全文
Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。 本文主要通過以下幾個方面來詳細地介紹一下Western Blot技術: 一、原理 二、分類
Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。一、原理與Southern或Northern雜交方法類似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被
摘要：綜述了RAPD技術的一些理論性問題，包括RAPD與其它分子標記技術相比的優點，影響結果重復性的因素，顯性標記產生的原因，條帶取舍的標準等。提出在實驗中解決這些問題的一些方法：嚴格控制反應條件，采用單倍體和單劑量標記，系統學研究中要結合其它方法進行分析，定位基因時要選用合適的群體等。
基因工程小鼠基因型PCR鑒定的基本原則是利用基因工程小鼠基因組與野生型小鼠基因組的序列差異，以小鼠基因組DNA為模板進行PCR，并以凝膠電泳比對比不同基因型特異產物的大小，根據條帶大小來區分小鼠的不同基因型。上期我們講述了CRISPR/Cas9完全性基因敲除鼠的鑒定，今天我們就開始學習CRISPR/
在各個論壇上看以過許多凝膠電泳分析的軟件，但沒有UVP使用的Labwork的介紹。如果你購買了UVP的凝膠電泳拍攝及分析系統，上面就會帶一個labwork分析軟件。打開這個軟件你就可以發現其界面非常熟悉，原來這就是Media Cybernetics公司利用Imageproplus程序的內核專門應用于
基因工程小鼠基因型PCR鑒定的基本原則是利用基因工程小鼠基因組與野生型小鼠基因組的序列差異，以小鼠基因組DNA為模板進行PCR，并以凝膠電泳比對比不同基因型特異產物的大小，根據條帶大小來區分小鼠的不同基因型。上期我們講述了CRISPR/Cas9條件性基因敲除鼠的鑒定，今天我們就開始學習CRISPR/
差異顯示聚合酶鏈反應（PCR) 可促進在諸多物種中與污染暴露相關的新分子標志物的鑒定。至今，已有多種差異顯示方法被詳細描述。這里，我們描述了一種改良的RNA 隨機引物觸發的 PCR 方 法（RNAarbitrarily primed PCR， RAP-PCR) , 主要涉及通過 羅 丹 明（rhod
11. 結果分析 CCCC. 條帶有時清晰，有時很散，不知為何？ 解答：可能原因：樣品可能存在降解；轉膜不及時造成擴散；轉移緩沖液甲醇濃度（ＮＣ膜可加到２０％，ＰＶＤＦ加到１５％）。 DDDD. 顯色目的條帶又細又淺，靶蛋白是27KD的bcl-xl和67KD 的c-myc
##六、從組織或培養細胞提取 RNARNA可以從各種來源的樣本包括培養的細胞（例如神經元細胞、肝細胞等）和組織中分離得到（見 注 釋 1) 。 mRNA 的 純 化 對 FRAP-PCR 方法來說并不需要，因為mRNA 僅占細胞總 R N A 的 3 % ?5 % (13)。因而在本章所描述
實驗步驟 ##一、 從組織和培養細胞中分離RNA1.TRIzol試 劑（Invitrogen)。該試劑含有苯酚和硫氰酸鹽化合物，操作時應穿實驗服，戴手套，存放于 4°C 。2.氯仿。3.異丙醇。4.乙醇。5.焦炭酸二乙酯（DEPC) 處理的水
DDDD.顯色目的條帶又細又淺，靶蛋白是27KD的bcl-xl和67KD 的c-myc，應該是高表達。每個涌道上50-70μg蛋白，開始用半干轉移，后來用濕轉14v，16h，用PVDF膜轉移。膠轉移后染色檢測，發現小分子量的基本轉移走了，可是為什么條帶老是不粗不濃呢?解答：可能跟你的一抗有關
實驗步驟 總蛋白質的檢測 1. 總蛋白質色度法染色 簡便的目視檢測、相對簡單的使用及廣大熟悉方法的用戶基礎群，使得考馬斯亮藍(C B B )—直是最普遍使用的總蛋白質凝膠染色劑。如需要比考馬斯亮藍染色更高的檢測敏感度，那么銀
PCR反應五要素：參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+引物： 引物是PCR特異性反應的關鍵，PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引
PCR反應體系與反應條件 標準的PCR反應體系： 10×擴增緩沖液 10ul 4種dNTP混合物 各200umol/L 引物 各10～1
PCR反應體系與反應條件 標準的PCR反應體系： 10×擴增緩沖液 10ul 4種dNTP混合物 各200umol/L 引物 各10～100pmol 模板
PCR反應體系與反應條件 標準的PCR反應體系： 10×擴增緩沖液 10ul 4種dNTP混合物 各200umol/L 引物 各10～100pmol 模板DNA 0.1～2ug Taq
基因工程小鼠基因型PCR鑒定的基本原則是利用基因工程小鼠基因組與野生型小鼠基因組的序列差異，以小鼠基因組DNA為模板進行PCR，并以凝膠電泳比對比不同基因型特異產物的大小，根據條帶大小來區分小鼠的不同基因型。上期我們講述了PCR膠濃度、電泳電壓及時間的選擇，今天我們就開始學習CRISPR/Cas9完
PCR反應五要素： 參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+ 引物： 引物是PCR特異性反應的關鍵，PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量
PCR反應體系與反應條件 標準的PCR反應體系： 10×擴增緩沖液 10ul 4種dNTP混合物 各200umol/L 引物 各10～100pmol 模板DNA 0.1～2ug
estern Blot（WB）可以說是生物學方向的同學最...最基本的實驗技能了，然而好看的 WB 總是別人的，自己的 WB 總是雜帶叢生，尤其是新課題、新抗體，總在目的條帶附近出現非特異性條帶。產生這種狀況的原因是什么呢、用下面的幾個例子，咱們一起研究一下。 案例一：啥也沒有 原因：比較多
estern Blot（WB）可以說是生物學方向的同學最...最基本的實驗技能了，然而好看的 WB 總是別人的，自己的 WB 總是雜帶叢生，尤其是新課題、新抗體，總在目的條帶附近出現非特異性條帶。產生這種狀況的原因是什么呢、用下面的幾個例子，咱們一起研究一下。 案例一：啥也沒有 原因：比較多
estern Blot（WB）可以說是生物學方向的同學最...最基本的實驗技能了，然而好看的 WB 總是別人的，自己的 WB 總是雜帶叢生，尤其是新課題、新抗體，總在目的條帶附近出現非特異性條帶。產生這種狀況的原因是什么呢、用下面的幾個例子，咱們一起研究一下。 案例一：啥也
mRNA差異顯示技術（differential display，DD）是用于研究基因的差異表達的新方法。該技術自1992年被首次報道后，即以其不可替代的優勢被廣泛應用于生物醫學領域。在應用過程中不斷得到改進，并產生了諸多衍生技術如RPA（RNA finger printing by arbitrar
基因工程小鼠基因型PCR鑒定的基本原則是利用基因工程小鼠基因組與野生型小鼠基因組的序列差異，以小鼠基因組DNA為模板進行PCR，并以凝膠電泳對比不同基因型特異產物的大小，根據條帶大小來區分小鼠的不同基因型。上期我們講述了CRISPR/Cas9條件性基因敲入鼠的鑒定，今天我們就開始學習CRISPR/C
不同生長時期兩種棉花處理不同根區土壤細菌16S rDNA的DGGE圖譜如圖1. 14所示。結果表明，各個生長時期兩種棉花處理不同根區土壤樣品泳道幾乎均被條帶所布滿，多數條帶為共有條帶，這說明兩種棉花處理各根區土壤細菌豐富而穩定，并具有較高的相似性，不受轉雙價棉種植的影響。圖1. 14 不同生長時
在這個讀圖的時代，凡是能用一張圖片描述清楚的問題都不是問題，如果不夠，那就兩張~ 比如這段：“姑娘相貌嬌美，膚色白膩， 她身穿一件靛青織錦的上衣，顏色甚是鮮艷，但在她容光映照之下，再燦爛的錦緞也已顯得黯然無光……” 用圖片說就是： 是不是既簡單又粗暴？ 同樣的，一張好的Figure勝過千
RT-PCR實驗有三步：抽提RNA，RT，PCR。 要求：1.做RT前必需測RNA濃度，逆轉錄體系對RNA量還是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不會出太大問題。 3. PCR，按常規。但如需擴長片段，則對前兩步要求較高，需要有完整的cDNA存在，不是單
01基本原理免疫印跡（Western Blot） 采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質，“探針”是抗體，“顯色”用標記的二抗。SDS-PAGE 可對蛋白質樣品進行分離，轉移到固相載體——例如硝酸纖維素薄膜（NC）上。固相載體可以吸附蛋白質，并保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。
實時 RT-PCR 與 DNA 陣列結果的比較G3PDH 是在大多數細胞中表達的含量豐富的看家基因，但在某些條件下的表達發生改變（ 11 ），通過 DNA 陣列雜交發現， G3PDH 的轉錄本在亞克隆 20863 和 20861 中的表達相同。實時定量
PCR產物的電泳檢測時間 一般為48h以內，有些最好于當日電泳檢測，大于48h后帶型不規則甚致消失。 假陰性，不出現擴增條帶 PCR反應的關鍵環節有①模板核酸的制備，②引物的質量與特異性，③酶的質量及， ④PCR循環條件。尋找原因亦應針對上述環節進行分析研究。 模板：①模板中含有