如何利用透析法進行脫鹽濃縮蛋白
二、蛋白質的分離純化蛋白質的分離純化方法很多,主要有:(一)根據蛋白質溶解度不同的分離方法1、蛋白質的鹽析中性鹽對蛋白質的溶解度有顯著影響,一般在低鹽濃度下隨著鹽濃度升高,蛋白質的溶解度增加,此稱鹽溶;當鹽濃度繼續升高時,蛋白質的溶解度不同程度下降并先后析出,這種現象稱鹽析,將大量鹽加到蛋白質溶液中,高濃度的鹽離子(如硫酸銨的SO4和NH4)有很強的水化力,可奪取蛋白質分子的水化層,使之“失水”,于是蛋白質膠粒凝結并沉淀析出。鹽析時若溶液pH在蛋白質等電點則效果更好。由于各種蛋白質分子顆粒大小、親水程度不同,故鹽析所需的鹽濃度也不一樣,因此調節混合蛋白質溶液中的中性鹽濃度可使各種蛋白質分段沉淀。影響鹽析的因素有:(1)溫度:除對溫度敏感的蛋白質在低溫(4度)操作外,一般可在室溫中進行。一般溫度低蛋白質溶介度降低。但有的蛋白質(如血紅蛋白、肌紅蛋白、清蛋白)在較高的溫度(25度)比0度時溶解度低,更容易鹽析。(2)pH值:大多數蛋......閱讀全文
輔酶的作用和應用
與酶蛋白結合疏松,用透析法容易與蛋白部分分開的有機小分子。由于輔酶在酶催化反應中其化學組分發生了變化,因此可以認為輔酶是一種特殊的底物或者稱為“第二底物”。這種所謂的第二底物可以被許多酶所利用。例如,已知有約七百種酶可以利用輔酶NADH進行催化。在細胞內,反應后的輔酶可以被再生,以維持其胞內濃度在一
輔酶的基本定義
與酶蛋白結合疏松,用透析法容易與蛋白部分分開的有機小分子。?由于輔酶在酶催化反應中其化學組分發生了變化,因此可以認為輔酶是一種特殊的底物或者稱為“第二底物”。這種所謂的第二底物可以被許多酶所利用。例如,已知有約七百種酶可以利用輔酶NADH進行催化。硫胺素在細胞內,反應后的輔酶可以被再生,以維持其胞內
治療甲亢危象的相關介紹
甲亢危象前期或甲亢危象診斷以后,無需等化驗結果,應盡早治療。治療的目的是糾正嚴重的甲狀腺毒癥和誘發疾病,防止功能衰竭的支持療法。 1.一般治療 (1)吸氧。 (2)應用鎮定劑。 (3)積極物理降溫。 (4)糾正水電解質紊亂。 2.特殊治療 (1)降低循環中甲狀腺激素水平丙硫氧嘧啶和
輔酶的結構功能特點
與酶蛋白結合疏松,用透析法容易與蛋白部分分開的有機小分子。?由于輔酶在酶催化反應中其化學組分發生了變化,因此可以認為輔酶是一種特殊的底物或者稱為“第二底物”。這種所謂的第二底物可以被許多酶所利用。例如,已知有約七百種酶可以利用輔酶NADH進行催化。在細胞內,反應后的輔酶可以被再生,以維持其胞內濃度在
影響發光劑標記技術中標記的因素
影響標記的因素:1.發光劑的選擇。2.被標記蛋白質的性質:選用較高的純度和免疫學穩定性的抗原進行標記;抗體作為被標記物時,則要求具有較高的效價,應用提純的IgG來代替全血清。3.選擇正確的標記方法。4.原料比:IgG:發光劑:交聯劑的克分子比(mol:mol:mol)會影響結合物的發光效率。5.標記
免疫脂質體的延伸相關內容
1、形態、粒徑及其分布 采用掃描電鏡、激光散射法或激光掃描法測定。根據給藥途徑不同要求其粒徑不同。 脂質體如注射給藥脂質體的粒徑應小于200nm,且分布均勻,呈正態性,跨距宜小。 2、包封率和載藥量 包封率:包封率=(脂質體中包封的藥物/脂質體中藥物總量)×100% 一般采用葡聚糖凝膠、
簡述馬來酸依那普利膠囊的藥代動力學
依那普利是前體藥物,其乙酯部分在肝內被迅速水解,轉化成它的有效代謝產物--依那普利拉來發揮降壓作用。口服依那普利約68%被吸收,與食物同服不影響生物利用度。服藥后1小時,血漿依那普利濃度可達峰值。 服藥后3.5~4.5小時,依那普利拉血漿濃度可達峰值,半衰期為11小時。肝功能異常者依那普利轉變
熒光抗體(fluorescent-antibody)的制備
一、熒光素與抗體結合?1、透析法?(1)概述:適用于蛋白質含量低、樣品體積小的抗體溶液的標記。標記較均勻,非特異熒光較低。?(2)步驟:將含10mg/ml的Ig溶液10ml裝入透析袋,將上述透析袋放入燒杯中,含0.1mg/ml FITC的pH9.4的碳酸鹽緩沖液100ml;4℃磁力攪拌24h,取出透
簡述阿托伐他汀鈣的適應癥
高膽固醇血癥原發性高膽固醇血癥患者。包括家族性高膽固醇血癥(雜合子型)或混合型高脂血癥(相當于Fredrickson分類法的IIa和IIb型)患者,如果飲食治療和其他非藥物治療療效不滿意,應用本品可治療其總膽固醇(TC)升高、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)升高、載脂蛋白B(Apo B)升高和甘
超速離心法測定血漿蛋白結合率
超速離心法的基本原理是在一定的離心力場的作用下,根據小分子與蛋白質在液體介質中沉降速度或密度不同而停留在液體介質中不同的位置而分離的方法。在藥物蛋白結合率的測定中,蛋白結合的藥物形成沉淀,游離的藥物小分子在離心管的上清液中被定量測定。此法的優點是克服了Gibbs-Donna效應以及膜吸附效應等與
純化膠原蛋白的方法介紹
可用于膠原蛋白的純化方法包括鹽析法、透析法、離心法、電泳法和色譜法,其中鹽析法、離心法和電泳法最為常用。由于單一方法難以完全分離純化膠原蛋白,實際操作都是通過復合法來達到分離純化膠原蛋白的目的。鹽析法一般采用高濃度NaCl;離心法常選用制備型低溫超速離心機;電泳法多采用十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電
概述可用于膠原蛋白的純化方法
可用于膠原蛋白的純化方法包括鹽析法、透析法、離心法、電泳法和色譜法,其中鹽析法、離心法和電泳法最為常用。由于單一方法難以完全分離純化膠原蛋白,實際操作都是通過復合法來達到分離純化膠原蛋白的目的。鹽析法一般采用高濃度NaCl;離心法常選用制備型低溫超速離心機;電泳法多采用十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝
使用注射用阿莫西林鈉克拉維酸鉀過量的介紹
1、藥物過量: 用藥過量的患者通常是無癥狀的。一旦出現,主要表現為胃腸道癥狀、水及電解質紊亂,可采用水和電解質的對癥療法并保持水與電解質平衡,血中的注射用阿莫西林鈉克拉維酸鉀可通過透析法清除。 曾有阿莫西林結晶尿的報道。(參見【注意事項】) 2、藥代動力學: 注射用阿莫西林鈉克拉維酸鉀的
X射線晶體學的原理和方法
原理:蛋白質晶體內部結構為三維空間周期、有序、重復排列,要求每個結晶重復單位(分子或其復合體)的化學組成與分子構象是均一的。方法:為了獲得可供衍射的單晶,就需要將純化后的生物樣品進行晶體生長。晶體生長的方法有很多,如氣相擴散法、液相擴散法、溫度漸變法、真空升華法、對流法等等,而目前應用最廣泛的晶體生
簡述阿托伐他汀的適應癥
1、高膽固醇血癥: 原發性高膽固醇血癥患者,包括家族性高膽固醇血癥(雜合子型)或混合性高脂血癥(相當于Fredrickson分類法的IIa和IIb型)患者,如果飲食治療和其它非藥物治療療效不滿意,應用本品可治療其總膽固醇升高、低密度脂蛋白膽固醇升高、載脂蛋白B升高和甘油三酯升高。 在純合子家
關于阿托伐他汀鈣片的簡介
阿托伐他汀鈣片,適應癥為高膽固醇血癥原發性高膽固醇血癥患者。包括家族性高膽固醇血癥(雜合子型)或混合型高脂血癥(相當于Fredrickson分類法的IIa和IIb型)患者,如果飲食治療和其他非藥物治療療效不滿意,應用本品可治療其總膽固醇(TC)升高、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)升高、載脂蛋白
關于立普妥的適應癥介紹
1、高膽固醇血癥: 原發性高膽固醇血癥患者,包括家族性高膽固醇血癥(雜合子型)或混合性高脂血癥(相當于Fredrickson分類法的IIa和IIb型)患者,如果飲食治療和其它非藥物治療療效不滿意,應用本品可治療其總膽固醇升高、低密度脂蛋白膽固醇升高、載脂蛋白B升高和甘油三酯升高。 在純合子家
欲實現兩種離子的完全分離通常采取哪些方法
欲實現兩種離子的完全分離通常采取方法:置換,絡合分離,沉淀分離,給定pH值/電位下電解,選擇性透過,離子交換(利用樹脂)。置換沉淀分離,有機絮凝劑和無機礦物吸附,調整pH值促進沉淀,離子交換(利用樹脂)絡合分離,電鍍廢水處理、廢水沉降絮凝劑。固體混合物,首選物理方法,依靠比重差別,溶解性和熔沸點的差
脂質體的質量研究
粒徑 脂質體的粒徑一般為nm級,用光學顯微鏡和電子顯微鏡粗略測量其粒徑和粒徑分布。 測定包封率 測定包封率的關鍵是把未包封的游離藥物從脂質體上分離出來,常用的分離方法有柱層析法、透析法、超速離心法、超濾膜過濾法等。 滲漏率 滲漏率即為脂質體貯存期間包封率的變化情況,也就是貯存期間包封量
腦脊液蛋白電泳的臨床意義及注意事項
臨床意義 (1)白蛋白升高:椎管梗阻、腦腫瘤、部分血管性疾病。 (2)α1球蛋白: ①升高:腦部感染、急性細菌性腦膜炎、脊髓灰質炎。 ②降低:腦外傷急性期。 (3)α2球蛋白升高:腦部轉移瘤、癌性腦膜炎、膠質瘤、橋腦小腦角腫瘤。 (4)β球蛋白升高:多發性硬化癥、亞急性硬化性全腦炎、震顫
血漿蛋白結合率的分析研究趨勢
近年來,隨著藥動學的深入研究,藥物與血漿蛋白的結合率已成為藥學領域中的研究熱點,特別是對于那些血漿蛋白結合率高的藥物。平衡透析法雖然操作復雜且費時,但是分析成本低,可以直接得到游離小分子的濃度,仍然為常規的測定方法。光譜法可以測定藥物與蛋白質結合率,此外還可以獲得蛋白質和藥物的結合位點數,結合位
茶多糖的制備主要方法
1.有機溶劑沉淀法 茶多糖在有機溶劑中的溶解度較小通過有機溶劑沉淀的方法可將茶多糖與其他成分初步分離。用到的有機溶劑主要有乙醇、丙酮、乙酸乙酯等。 2.季銨鹽沉淀法 在酸性、中性或弱堿性條件下,一些季銨鹽如溴代十六烷基三甲銨(CTAB)、十六烷基鹽酸吡啶(CPC)能與茶多糖形成不溶于水的鹽,以
非特異性染色產生原因及其解決方案
⑴游離熒光素殘留在二抗中。一部分熒光素未與蛋白質結合,形成了聚合物和衍化物,而不能被透析除去。二抗配置時用透析法或層析法分離熒光素標記的二抗和游離的二抗。購買高質量、高純度的熒光素二抗。⑵抗體以外的血清蛋白與熒光素結合形成熒光素脲蛋白,可與組織成分結合。⑶組織抗原封閉不全。除去檢查的抗原以外,組織中
關于復方替卡西林的藥物簡介
克拉維酸鉀本身僅有少許的抗菌作用,與替卡西林合并制成特美汀后,成為一種具有廣譜抗菌作用的藥物,適合于治療廣泛的細菌感染。 1、微生物學 本藥具有廣譜殺菌作用,對下列細菌有效。革蘭氏陽性需氧菌:葡萄球菌屬(包括金黃色葡萄球菌及表皮葡萄球菌),鏈球菌屬(包括糞鏈球菌) ; 革蘭氏陽性厭氧菌:消
蛋白質鹽析過程中應注意什么
鹽析:當鹽濃度增高到一定值時,蛋白質的溶解度逐漸下降,直至蛋白質析出。1) 鹽的選擇蛋白質沉淀時,常用(NH4)2SO4優點:溶解度大,且對溫度不敏感;分級效果好;有穩定蛋白質結構的作用;價廉,廢液可作肥料。缺點:沉淀后樣品需脫鹽。2) (NH4)2SO4鹽析固體法:攪拌下,少量多次加入飽和溶液法:
飛行時間質譜儀對送檢樣品有哪些要求?
(1)試樣的種類、組分及樣品量 本儀器擅長測定多肽、蛋白質,也可以測定其它生物大分子,如,多糖、核酸和高分子聚合物、合成寡聚物以及一些相對分子質量較小的有機物,如,C60或C60的接枝物等。被測樣品可以是單一組分也可以是多組分的,但,樣品組分越多,譜圖就越復雜,譜圖分析的難度也越大;如果電離過
抗原抗體的生物活性
(1)結合特異性抗原:抗體與其他免疫球蛋白分子區別,就在于抗體能與相應抗原發生特異性結合,在體內導致生理或病理效應;在體外產生各種直接或間接的可見的抗原抗體結合反應。抗體是靠其分子上的特殊的結合部位與抗原結合的。 (2)激活補體:抗體與相應抗原結合后,借助暴露的補體結合點去激活補體系統、激發補
飛行時間質譜儀的樣品準備
(1)試樣的種類、組分及樣品量 本儀器擅長測定多肽、蛋白質,也可以測定其它生物大分子如多糖、核酸和高分子聚合物、合成寡聚物以及一些相對分子質量較小的有機物,如 C60 或 C60 的接枝物等。 被測樣品可以是單一組分也可以是多組分的,但樣品組分越多,譜圖就越復雜,譜圖分析的難度也越大;如果電離
抗原抗體的生物活性
(1)結合特異性抗原:抗體與其他免疫球蛋白分子區別,就在于抗體能與相應抗原發生特異性結合,在體內導致生理或病理效應;在體外產生各種直接或間接的可見的抗原抗體結合反應。抗體是靠其分子上的特殊的結合部位與抗原結合的。(2)激活補體:抗體與相應抗原結合后,借助暴露的補體結合點去激活補體系統、激發補體的溶菌
飛行時間質譜儀對樣品的要求
(1)試樣的種類、組分及樣品量本儀器擅長測定多肽、蛋白質,也可以測定其它生物大分子如多糖、核酸和高分子聚合物、合成寡聚物以及一些相對分子質量較小的有機物,如,C60或C60的接枝物等。被測樣品可以是單一組分也可以是多組分的,但樣品組分越多,譜圖就越復雜,譜圖分析的難度也越大;如果電離過程中組分之間存