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用能吸附蛋白質的材料裝填成小柱,使欲除蛋白質的樣品流過小柱,樣品中的蛋白質被柱填料吸附,欲測組分不被吸附,從小柱中流出。現已有廠家將這種小柱做成商品出售,稱為預柱。這種預柱可以直接連在HPLC的進樣裝置上,含蛋白質的樣品通過預柱后可直接進入HPLC系統分析。如分析尿中的某些代謝產物時,可將樣品通過預柱,除去蛋白質,直接進入HPLC分析。這種預柱有各種規格,適用于各種不同的目的。......閱讀全文
用能吸附蛋白質的材料裝填成小柱,使欲除蛋白質的樣品流過小柱,樣品中的蛋白質被柱填料吸附,欲測組分不被吸附,從小柱中流出。現已有廠家將這種小柱做成商品出售,稱為預柱。這種預柱可以直接連在HPLC的進樣裝置上,含蛋白質的樣品通過預柱后可直接進入HPLC系統分析。如分析尿中的某些代謝產物時,可將樣品通過
利用分子大小不同的物質在流過凝膠固定相時的保留時間不同,大分子首先流出,小分子最后流出,可將待測小分子化合物與大分子蛋白質分離。這時待測小分子化合物的濃度被流動相所稀釋,必要時還要進行濃縮后再用色譜分析。
膜分離技術包括超濾、反滲析、電滲析、微孔過濾等。利用膜分離技術可將樣品小分子化合物和大分子的蛋白質很好地分離。 超濾是一種除去樣品中蛋白質和其他大分子的方法,是能用分子分離的薄膜分離技術,依靠薄膜兩側壓力差作為推動力來分離溶液中不同分子量的物質。與沉淀法相比,其優點是適用于小量樣品,不用稀釋樣品
鹽析法 利用不同蛋白質在高濃度的鹽溶液中溶解度不同程度的降低來沉淀除去蛋白質。在低鹽濃度下,蛋白質溶解度隨著鹽濃度的升高而增加,稱為鹽溶作用。當鹽濃度不斷升高時,不同蛋白質的溶解度又以不同程度下降,并先后析出沉淀,稱為鹽析作用。這是由蛋白質分子內及分子間電荷的極性基團的靜電引力造成的。由于水中加
加熱法 當待測組分熱穩定性好時,可采用加熱的方法將一些熱變性蛋白質沉淀。加熱溫度視待測組分的熱穩定性而定,通常可加熱到90℃。蛋白質沉淀后可用離心或過濾除去,這種方法最簡單,但只能除去熱變性蛋白質。
(1)加熱法當待測組分熱穩定性好時,可采用加熱的方法將一些熱變性蛋白質沉淀。加熱溫度視待測組分的熱穩定性而定,通常可加熱到90℃。蛋白質沉淀后可用離心或過濾除去,這種方法最簡單,但只能除去熱變性蛋白質。(2)鹽析法利用不同蛋白質在高濃度的鹽溶液中溶解度不同程度的降低來沉淀除去蛋白質。在低鹽濃度下,蛋
柱色譜法分離條件的探索柱色譜法的實驗條件，例如選用什么吸附劑和洗脫劑較好，各個組分按什么順序從柱中洗脫出來，每一分洗脫液中是含單一組分或就含幾種沒有分開的組分等，都可以在薄層上進行探索和檢驗。薄層上所有的展開劑雖不完全照搬柱色譜法上，但仍有參考價值。
利用蛋白質在等電點時溶解度最低,用酸、堿調節pH值,可使蛋白質沉淀析出,但這時沉淀不完全,可與有機溶劑沉淀法、鹽析法聯合使用。
柱層析技術(Column chromatography) 又稱柱色譜技術，主要原理是根據樣品混合物中各組分在固定相和流動相中分配系數不同，經多次反復分配將組分分離開來。
柱填料是 GPC 分離的關鍵因素,其結構直接影響儀器性能及分離效果。因此,要求柱填料具有化學惰性良好、有一定的機械強度、不易變形、流動阻力小、不吸附待測物、分離范圍廣等性質。柱填料可分為有機凝膠和無機凝膠。 一般來說,有機凝膠要求濕法裝柱,柱效較高,但其熱穩定性、機械強度和化學惰性差,凝膠易于老