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這個要看你在做PCR前的加樣量是否一致。如果加樣量是一致的，而內參做出來差別大（比如3-4個CT值）那說明你的實驗體系有嚴重的問題。理論上加入的DNA量一樣多，內參的CT值應該都一樣。如果你能肯定加樣量是一致的，那說明你的樣本要么降解了，要么就是你的實驗處理對內參的量產生了影響，必須換一個基因做內參。還有就是你的加樣量誤差很大。這樣的話，建議你內參和目的基因在一個管子內做。各自選用不同的顏色標記的探針，不用CYBR Green。這樣就沒有任何加樣誤差了。這個所謂的“校正”就是保持每個樣本的加樣量的一致。......閱讀全文
Ct值：C代表Cycle，t代表threshold，Ct值的含義是：每個反應管內的熒光信號到達設定的域值時所經歷的循環數PCR反應的前15個循環的熒光信號作為熒光本底信號，熒光域值的缺省設置是3-15個循環的熒光信號的標準偏差的10倍
Ct值：C代表Cycle，t代表threshold，Ct值的含義是：每個反應管內的熒光信號到達設定的域值時所經歷的循環數PCR反應的前15個循環的熒光信號作為熒光本底信號，熒光域值的缺省設置是3-15個循環的熒光信號的標準偏差的10倍
擴增效率低：反應條件不夠優化。設計更好的引物或探針；改用三步法進行反應；適當降低退火溫度；增加鎂離子濃度等。 PCR 各種反應成分的降解或加樣量的不足。 PCR 產物太長： 一般采用 80～150 bp 的產物長度。
核心提示: 肝癌是發生在肝臟的惡性腫瘤，它會破壞肝臟的功能，所造成的癥狀折磨性是很強烈的。由于此病的發生跟病毒感染，飲食，環境等因素有關，需要人們做好相對應的護理，減少發生肝癌的幾率。患病后要及時的去進行檢查，做好充分的檢查措施是很重要的，例如進行肝癌CT檢查。 肝癌在
檢測熒光信號的步驟有誤：一般 SG 法采用 72℃ 延伸時采集，Taqman 法則一般在退火結束時或延伸結束采集信號。 引物或探針降解：可通過 PAGE?電泳檢測其完整性。 模板量不足：對未知濃度的樣品應從系列稀釋樣本的最高濃度做起。 模板降解：避免樣品制備中雜質的引入及反復凍融的情況。??
如果有標準曲線，按照標準曲線計算。一般都是相對量。則用delta delta CT方法來計算。舉例如下：對照組基因A的CT值為20， 內參（比如βactin)CT值15。實驗組基因A CT值18，內參CT值14。首先算加樣量：delta CT=15-14=1。2的1次方是2。也就是說實驗組的加樣量是
Ct值：C代表Cycle,t代表threshold,Ct值的含義是：每個反應管內的熒光信號到達設定的域值時所經歷的循環數PCR反應的前15個循環的熒光信號作為熒光本底信號,熒光域值的缺省設置是3-15個循環的熒光信號的標準偏差的10倍
看了你空間里的溶解曲線，你可以看到溶解峰的溫度都很低，全在80以下，你擴出來的東西多半只是引物，你跑定量的時候有做NTC的孔嗎，如果有做，可以對照NTC組和加了模板的組，溶解峰還是一樣的話，那你擴出來的產物100%是引物了。再有，你的擴增曲線問題，CT太了，一般做定量認為CT=25時，是一個模板擴出
如果有標準曲線，按照標準曲線計算。一般都是相對量。則用delta delta CT方法來計算。舉例如下：對照組基因A的CT值為20， 內參（比如βactin)CT值15。實驗組基因A CT值18，內參CT值14。首先算加樣量：delta CT=15-14=1。2的1次方是2。也就是說實驗組的加樣量是
如果有標準曲線，按照標準曲線計算。 一般都是相對量。則用delta delta CT方法來計算。舉例如下： 對照組基因A的CT值為20， 內參（比如βactin)CT值15。實驗組基因A CT值18，內參CT值14。 首先算加樣量：delta CT=15-14=1。2的1次方是2。也就是說。