關于cDNA探針的意義的介紹
逆轉錄現在已成為一項重要的分子生物學技術，廣泛用于基因的克隆和表達。從逆轉錄病毒中提取的逆轉錄酶已商品化，最常用的有AMV逆轉錄酶。利用真核Mrna3’末端存在一段聚腺苷酸尾，可以合成一段寡聚胸苷酸（oligo(dT)）用作引物，在逆轉錄酶催化下合成互補于mRNA的cRNA鏈，然后再用RNase H將mRNA消化掉，再加入大腸桿菌的DNA聚合酶I催化合成另一條DNA鏈，即完成了從mRNA到雙鏈DNA的逆轉錄過程。 所得到的雙鏈cDNA分子經S1核酸酶切平兩端后接一個有限制酶切點的接頭（linker），再經特定的限制酶消化產生粘性末端，即可與含互補末端的載體進行連接。常用的克隆載體是λ噬菌體DNA，如λgt，EMBL和Charon系列等。用這類載體可以得到包含104以上的轉化子的文庫，再經前面介紹的篩選方法篩選特定基因克隆。用這種技術獲得的DNA探針不含有內含子序列。因此尤其適用于基因表達的檢測。......閱讀全文
關于cDNA探針的意義的介紹
逆轉錄現在已成為一項重要的分子生物學技術，廣泛用于基因的克隆和表達。從逆轉錄病毒中提取的逆轉錄酶已商品化，最常用的有AMV逆轉錄酶。利用真核Mrna3’末端存在一段聚腺苷酸尾，可以合成一段寡聚胸苷酸（oligo(dT)）用作引物，在逆轉錄酶催化下合成互補于mRNA的cRNA鏈，然后再用RNase
cDNA 探針的制備方法
首先需分離純化相應mRNA，這從含有大量mRNA的組織、細胞中比較容易做到，如從造血細胞中制備α或β珠蛋白mRNA。有了mRNA作模板后，在逆轉錄酶的作用下，就可以合成與之互補的DNA(即cDNA)，cDNA與待測基因的編碼區有完全相同的堿基順序，但內含子已在加工過程中切除。
cDNA探針的原理簡介
cDNA（complementary DNA）是指互補于mRNA的DNA分子。而以此制作的DNA探針稱為cDNA探針。 cDNA是由RNA經一種稱為逆轉錄酶（reverse transcriptase）的DNA聚合酶催化產生的，這種逆錄酶是Temin等在70年代初研究致癌RNA病毒時發現的。該
分子雜交CDNA探針的技術特點及應用介紹
cDNA（complementary DNA）是指互補于mRNA的DNA分子。cDNA是由RNA經一種稱為逆轉錄酶（reversetranscriptase）的DNA聚合酶催化產生的，這種逆錄酶是Temin等在70年代初研究致癌RNA病毒時發現的。該酶以RNA為模板，根據堿基配對原則，按照RNA的核
關于cDNA合成技術的介紹
以Riboclone M-MLV CDNA合成技術為例。 Riboclone M—MLV cDNA合成系統采用M—MLV反轉錄酶的RNase H缺失突變株取代AMV反轉錄酶,使合成的cDNA更長。該系統的第一鏈合成使用M-MLV反轉錄酶,cDNA第二鏈合成采用置換合成法,采用RNaseH和DN
關于cDNA文庫的原理介紹
一、定義 （cDNA Library）某種生物基因組轉錄的全部mRNA經反轉錄產生的cDNA片段分別與克隆載體重組，并將其引入到相應的宿主細胞中（一般為E.coli.）繁殖和擴增，理論上此群體就包含有該物種的全部mRNA信息，稱該生物基因組的cDNA文庫。 二、原理 經典cDNA文庫構建的
關于cDNA文庫的篩選鑒定的介紹
1．核酸雜交 是最常用，最可靠的方法之一，可大規模地分析文庫的克隆子。 1．同源探針：至少含有所需cDNA克隆的一部分確切序列，常用于以一個部分克隆分離cDNA文庫中的全長克隆。 2．部分同源探針：探針的序列與所要篩選的cDNA克隆的序列相關但不相同，常用于克隆家族基因。 3．總cDNA
關于cDNA第一鏈的合成介紹
所有合成cDNA第一條鏈的方法都要用依賴于RNA的DNA聚合酶(反轉錄酶)來催化反應,主要有兩個關鍵因素,一個是mRNA模板,另一個是反轉錄酶 [3] 。商品化反轉錄酶有從禽類成髓細胞瘤病毒純化到的禽類成髓細胞病毒（AMV）逆轉錄酶和從表達克隆化的Moloney鼠白血病病毒反轉錄酶基因的大腸桿菌
關于基因探針的標記介紹
為了確定探針是否與相應的基因組DNA雜交,有必要對探針加以標記,以便在結合部位獲得可識別的信號,通常采用放射性同位素32P標記探針的某種核苷酸α磷酸基。但近年來已發展了一些用非同位素如生物素-親合素系統、地高辛配體等作為標記物的方法。非同位素標記的優點是保存時間較長,而且避免了同位素的污染。最常
關于探針標記方法的介紹
①缺口平移標記法。利用的是DNA聚合酶I能修復DNA鏈的功能。該法先由DNaseI在DNA雙鏈上隨機切出切口，然后DNA聚合酶I沿缺口水解5´；端核苷酸，同時在3´；端修復加入被標記核苷酸，切口平行推移。缺口平移法快速、簡便、成本相對較低、比活性相對較高、標記均勻，多用于大分