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    關于免疫共沉淀的簡介

    免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋白質相互作用的經典方法,是確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。免疫共沉淀具有經翻譯后修飾的,處于天然狀態的優點。 免疫共沉淀(Co -Immunoprecipitation, Co-IP)是利用抗原和抗體的特異性結合以及細菌的Protein A或G特異性地結合到免疫球蛋白的Fc片段的現象開發出來的方法。其基本原理是,在細胞裂解液中加入抗興趣蛋白的抗體,孵育后再加入與抗體特異結合的結合于Agarose珠上的Protein A或G,若細胞中有與興趣蛋白結合的目的蛋白,就可以形成這樣一種復合物:“興趣蛋白—抗性蛋白抗體—Protein A或G—Agarose珠”,經變性聚丙烯酰胺凝膠電泳,復合物又被分開。然后經免疫印跡或質譜檢測目的蛋白。這種方法得到的目的蛋白是在細胞內與興趣蛋白天然結合的,符合體內實際情況,......閱讀全文

    關于免疫共沉淀的簡介

      免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋白質相互作用的經典方法,是確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。免疫共沉淀具有經翻譯后修飾的,處于天然狀態的優點。  免疫共沉淀(Co -Immunoprecipitation

    免疫共沉淀 簡介

    蛋白質間相互作用研究方法:免疫共沉淀1.用磷酸鹽緩沖液洗30塊10 cm培養板上的適宜細胞。刮去每塊板上的細胞到1 ml冰冷的EBC裂解緩沖液中。2.將每毫升細胞懸液轉移到微量離心管中,在微量離心機上4℃以最大速度離心15 min。3.收集上清(約30 ml)并加入30μg的適當抗體,4℃搖動免疫沉

    免疫共沉淀

    實驗概要 本實驗以植物葉片為試材介紹了免疫共沉淀的基本方法。 主要試劑 50uM雌激素,液氮,提取緩沖液TBS(50mM Tris-Cl,0.15M NaCl,pH 7.4,1mM PMSF,5mM Benzamidine),glycine-HCl,TBS,洗脫緩沖液(TBS,0.5

    關于酶免疫技術的簡介

      酶免疫技術是以酶標記的抗體或抗原為主要試劑的方法,是標記免疫技術的一種。近年來標記免疫技術飛速發展,應用不同標記物,根據不同原理、不同技術建立起來的檢測方法層出不窮,而方法的創建者往往給同類的方法以不同的名稱。因此確知某一方法屬于哪一類型,對該方法的正確理解有著重要意義。本節先敘述各種標記免疫技

    免疫共沉淀技術

    免疫沉淀可用于定位甲基化或轉錄因子結合的位置等DNA變化,但可能需要與假抗體進行斗爭。盡管ChIP-seq、DIP-seq和相關技術可以提供全基因組測定的相關信息,但它們并非總是有效。染色質免疫沉淀(chromatin immunoprecipitation, ChIP)或DNA免疫沉淀(DNA

    免疫共沉淀概述

    實驗概要本實驗以植物葉片為試材介紹了免疫共沉淀的基本方法。主要試劑50uM雌激素,液氮,提取緩沖液TBS(50mM Tris-Cl,0.15M NaCl,pH 7.4,1mM PMSF,5mM Benzamidine),glycine-HCl,TBS,洗脫緩沖液(TBS,0.5mg/mL 3

    免疫共沉淀的原理介紹

    免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation),簡稱 Co-IP,其原理是當細胞在非變性條件下被裂解時,完整細胞內存在的許多蛋白質-蛋白質間的相互作用被保留了下來, 如果用蛋白質 X 的抗體?anti-X(通常稱為 IP 抗體)將 X 特異地抓住并沉淀下來,那么與 X 在體內結合的蛋白質

    免疫共沉淀的實驗過程

    (1)轉染后24-48 h 可收獲細胞,加入適量細胞裂解緩沖液(含蛋白酶抑制劑),冰上裂解30min, 細胞裂解液于4°C, 最大轉速離心30 min后取上清;(2)取少量裂解液以備Western blot分析,剩余裂解液加1μg相應的抗體加入到細胞裂解液,4°C緩慢搖晃孵育過夜;(3)取10μl

    免疫共沉淀?試劑準備

    免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋白質相互作用的經典方法。是確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。其原理是:當細胞在非變性條件下被裂解時,完整細胞內存在的許多蛋白質-蛋白質間的相互作用被保留了下來。 試劑準備

    免疫共沉淀技術路線

    準備工作:? 預冷PBS,RIPA Buffer,細胞刮子(用保鮮膜包好后,埋冰下),離心機? 1. 用預冷的PBS洗滌細胞兩次,最后一次吸干PBS;? 2. 加入預冷的RIPA Buffer(1ml/107個細胞、10cm培養皿或150cm2培養瓶,0.5ml/5×106個細胞、6cm培養皿、

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