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細胞培養一定要保持工作區的無菌清潔，先用紫外燈和臭氧殺菌1h，然后通風30min，操作前需要換細胞間專用拖鞋，雙手帶上一次性橡膠手套并用75%乙醇消毒，穿上實驗服，戴上一次性口罩和帽子，整個無菌操作都應該在酒精燈的周圍進行。 1. 取對數生長期的貼壁細胞，棄掉舊培養基。 2. 用磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗細胞1-2遍。 (每10 cm2 培養表面積需要2 ml 溶液)。從與貼壁細胞層相對的容器一側輕輕加入沖洗液，以避免攪動細胞層，前后搖晃容器數次。 注：沖洗步驟可去除可能抑制消化酶作用的少量血清、鈣和鎂。 3. 從培養容器中吸出沖洗液并丟棄。 4. 向培養瓶中加入預熱的消化酶(例如：胰蛋白酶)；試劑量應足以覆蓋細胞層 (每10 cm2 大約0.5ml)。輕輕搖晃容器，使試劑完全覆蓋細胞層。 5. 將培養容器在室溫下孵育約2分鐘。 請注意，實際孵育時間根據所用細胞系不同可能有所差異。 6. 在顯微鏡下觀察細胞解......閱讀全文
細胞培養一定要保持工作區的無菌清潔，先用紫外燈和臭氧殺菌1h，然后通風30min，操作前需要換細胞間專用拖鞋，雙手帶上一次性橡膠手套并用75%乙醇消毒，穿上實驗服，戴上一次性口罩和帽子，整個無菌操作都應該在酒精燈的周圍進行。 1. 取對數生長期的貼壁細胞，棄掉舊培養基。 2. 用磷酸鹽緩沖液
細胞在培養瓶長成致密單層后，已基本上飽和，為使細胞能繼續生長，同時也將細胞數量擴大，就必須進行傳代（再培養）。傳代培養也是一種將細胞種保存下去的方法。同時也是利用培養細胞進行各種實驗的必經過程。懸浮型細胞直接分瓶就可以，而貼壁細胞需經消化后才能分瓶。一般使用蛋白水解酶（比如胰蛋白酶）消化貼壁細胞成單
細胞在培養瓶長成致密單層后，已基本上飽和，為使細胞能繼續生長，同時也將細胞數量擴大，就必須進行傳代（再培養）。傳代培養也是一種將細胞種保存下去的方法。同時也是利用培養細胞進行各種實驗的必經過程。懸浮型細胞直接分瓶就可以，而貼壁細胞需經消化后才能分瓶。一般使用蛋白水解酶（比如胰蛋白酶）消化貼壁細胞成單
多數細胞系和原代細胞都會以一種單層的形式生長（單層細胞）或者覆蓋在玻璃或經處理的塑料物體表面。為了保持細胞的健康與活躍增殖，通常需要對細胞進行有規律的傳代。最常見的傳代方法是使用蛋白酶如胰酶或膠原酶破壞細胞間以及細胞與培養介質間的連接。當細胞被解離成單細胞懸液時，再將它們稀釋并分發至新的培養容器中。
細胞在培養瓶長成致密單層后，已基本上飽和，為使細胞能繼續生長，同時也將細胞數量擴大，就必須進行傳代（再培養）。傳代培養也是一種將細胞種保存下去的方法。同時也是利用培養細胞進行各種實驗的必經過程。懸浮型細胞直接分瓶就可以，而貼壁細胞需經消化后才能分瓶。一般使用蛋白水解酶（比如胰蛋白酶）消化貼壁細胞
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。 2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入3ml此細胞的培養基
1、細胞貼壁和接觸抑制:懸液中分散的細胞很快就貼附在瓶壁.上，稱為細胞貼壁。細胞數目不斷增多，當貼壁細胞分裂生長到表面相互抑制時，細胞就會停止分裂增殖，這種現象稱為細胞的接觸抑制。 2、動物細胞培養技術的應用:制備病毒疫苗、制備單克隆抗體、檢測有毒物質、培養醫學研究的各種細胞。 3、細胞株傳
1、直接傳代法： ①待懸浮細胞長滿至80%-90%左右（細胞懸液變黃），即可傳代； ②用吸管吸棄細胞懸液1/2～2/3； ③加入適量的新鮮培養基，繼續培養。 2、離心傳代法： ①將細胞懸液轉移到離心管內； ②150g離心5min，棄上清； ③使用新鮮的培養基重懸細胞； ④吸管吸取
對于貼壁細胞傳代可參考以下方法：1、棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2、力口 2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養瓶中，置于37°C培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部 分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶
c是采用 生物工程技術進行克隆、提取而制取,它是一種天然酶，安全綠色的添加劑，無抗藥性。 該酶廣泛存在于人體多種組織中，鳥類和家禽的蛋清、哺乳動物的淚、 唾液、血漿、尿、乳汁等體液以及微生物中也含此酶，其中以蛋清含量最為豐富。從雞蛋清中提取分離的溶菌酶是由18種129個 氨基酸殘基構成的單一肽