直接法(direct ELISA)將抗原直接固定在固相載體上,加入酶標記的一級抗體,即可測定抗原總量,此一級抗體的特異性非常重要。優勢:操作手續簡短,因無須使用二抗可避免交互反應。缺點:試驗中的一抗都得用酶標記,但不是每種抗體都適合做標記,費用相對提高。間接法(indirect ELISA)此測定方法與直接法類似,差別在于一級抗體沒有酶標記,改用酶標記的二級抗體去辨識一級抗體來測定抗原量。優勢:二抗可以加強信號,而且有多種選擇能做不同的測定分析。不加酶標記的一級抗體則能保留它最多的免疫反應性。缺點:交互反應發生的機率較高。......閱讀全文
直接法(direct ELISA)將抗原直接固定在固相載體上,加入酶標記的一級抗體,即可測定抗原總量,此一級抗體的特異性非常重要。優勢:操作手續簡短,因無須使用二抗可避免交互反應。缺點:試驗中的一抗都得用酶標記,但不是每種抗體都適合做標記,費用相對提高。間接法(indirect ELISA)此測定方
在運用ELISA方法測定抗體方面,通常所用的方法稱為間接法,也是目前zui常用的方法,其原理:間接法首先用抗原包被于固相載體,這些包被的抗原必須是可溶性的,或者至少是極微小的顆粒,經洗滌,加入含有被測抗體之標本,再經孵育洗滌后,加入酶標記抗抗體,(對人的標本來說即加酶標抗人球蛋白IgG、IgM),再
在運用ELISA方法測定抗體方面,通常所用的方法稱為間接法,也是目前zui常用的方法,其原理:間接法首先用抗原包被于固相載體,這些包被的抗原必須是可溶性的,或者至少是極微小的顆粒,經洗滌,加入含有被測抗體之標本,再經孵育洗滌后,加入酶標記抗抗體,(對人的標本來說即加酶標抗人球蛋白IgG、IgM),再
在運用ELISA方法測定抗體方面,通常所用的方法稱為間接法,也是目前zui常用的方法,其原理:間接法首先用抗原包被于固相載體,這些包被的抗原必須是可溶性的,或者至少是極微小的顆粒,經洗滌,加入含有被測抗體之標本,再經孵育洗滌后,加入酶標記抗抗體,(對人的標本來說即加酶標抗人球蛋白IgG、IgM),再
基本方法的操作如下: 1.將病原體的抗原在碳酸鹽緩沖液中4~C過夜包被,形成固相抗原,洗滌去除未與固相結合或結合不緊的抗原后,用小牛血清或牛血清白蛋白等封閉,洗滌去除未結合的部分及雜質。 2.加入含待測抗體的臨床樣本如血清等,溫育一定時間后洗板;此時,待測抗體就會與固陽上特異抗原反應而
實驗方法原理圖1:間接法測抗體示意圖間接法首先用抗原包被于固相載體,這些包被的抗原必須是可溶性的,或者至少是極微小的顆粒,經洗滌,加入含有被測抗體之標本,再經孵育洗滌后,加入酶標記抗抗體,(對人的標本來說即加酶標抗人球蛋白IgG、IgM),再經孵育洗滌后,加底物顯色,底物降解的量,即為欲測抗體的量,
組成結構 1、 血清:操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血紅細胞迅速小心地分離。 2、 血漿:EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。 3、 細胞上清液:1000×g離心
不直接標記一抗而標記二抗,這是從生產成本上考慮的。二抗大部分是通用的,標記一次可以大量標記,比如10ml或者更多的濃縮液,可以生產上千上萬的試劑盒。一次檢測就行了而一抗種類很多,量少,如果標記一抗,比較費事。次次得檢測(標記完得檢測)。hrp標記不是很簡單的事科研用的試劑盒。單品銷售量很小的,不值當
雙抗體夾心法:(1)包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml,4℃過夜。次日,棄去孔內溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗滌,下同)。(2)加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中,置3
若待測電阻R的阻值較小,采用外接法測出的阻值較為準確,誤差較小;若待測電阻R阻值較大,采用內接法測出的阻值較為準確。 (1)采用外接法時 電流表中示數應是流過R的電流IR和通過電壓表電流IV之和,即I=IR+IV,則R=U/I=U/(IR+IV) 引起誤差的原因是電流I中增加了