(一)儀器1. 凈化工作臺2. 離心機3. 恒溫水浴箱4. 冰箱(4℃、-20℃、-70℃)5. 倒置相差顯微鏡6. 培養箱7. 液氮冰箱(二)玻璃器皿1. 吸管(彎頭、直頭)2. 培養瓶3. 玻璃瓶(250ml、100ml)4. 廢液缸(三)塑料器皿1. 吸頭2. 槍頭3. 膠塞4. 移液管(10ml)5. 15ml離心管6. 凍存管(1~2ml)(四)其他物品1. 微量加樣槍2. 紅血球計數板3. 記號筆4. 醫用橡皮膏5. 移液槍(五)試劑1. D-Hanks液2. 小牛血清3. 培養液4. 雙抗(青霉素、鏈霉素)5. 胰蛋白酶(0.08%)6. 1NHCl7. 7.4%NaHCO38. DMSO(分析純)或無色新鮮甘油 (一)細胞凍存1. 配制含10%DMSO或甘油、10~20%小牛血清的凍存培養液;2. 取對數生長期的細胞,用胰蛋白酶把單層生長的細胞消化下來,懸浮生長的細胞則直接將細胞移至15ml離心管中;3. 離心1......閱讀全文
方案20.1 冷凍細胞 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 細胞生長至對數晚期,以培養基制備高濃度細胞懸液,加入細
細胞的凍存 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 已長滿的細胞經胰蛋白酶處理后,重懸于凍存液中。兩種試劑即甘油和 DMSO 是常用的細胞保護劑,它
實驗方法原理細胞生長至對數晚期,以培養基制備高濃度細胞懸液,加入細胞保護劑,等份轉移至凍存管中,緩慢冷凍(圖 20.8)。細胞用胰酶消化后,加入含有細胞保護劑的培養基,分裝至凍存管中,然后將其夾到鋁條上,用紙質管包裹,放入隔熱儲存管中。將儲存管及其內容物于-70℃或-80℃存放4h或過夜,最后將含有
細胞凍存實驗可以用于:(1)妥善貯存細胞;(2)維持細胞生存;(3)節約人力、物力、時間及減少污染機會;(4)維持細胞發生遺傳性狀的穩定。實驗方法原理細胞生長至對數晚期,以培養基制備高濃度細胞懸液,加入細胞保護劑,等份轉移至凍存管中,緩慢冷凍。細胞凍存時向培養基中加入保護劑,即終濃度5%.15%的甘
細胞的凍存實驗主要用于:(1)長時間保存細胞系;(2)防止細胞保存液內產生冰晶。實驗方法原理已長滿的細胞經胰蛋白酶處理后,重懸于凍存液中。兩種試劑即甘油和 DMSO 是常用的細胞保護劑,它們在細胞保存液中起到防止細胞內冰晶形成的目的。血清的濃度經常增加至 20%。實驗材料細胞試劑、試劑盒胰蛋白酶凍存
實驗方法原理 已長滿的細胞經胰蛋白酶處理后,重懸于凍存液中。兩種試劑即甘油和 DMSO 是常用的細胞保護劑,它們在細胞保存液中起到防止細胞內冰晶形成的目的。血清的濃度經常增加至 20%。實驗步驟 1) 吸干已長滿細胞的細胞瓶內培養液。細胞不應在高密度狀態下凍存,并應在凍存的 24 小時內換液。2)
一、材料 (一)儀器 1.凈化工作臺 2.離心機 3.恒溫水浴箱 4.冰箱(4℃、-20℃、-70℃) 5.倒置相差顯微鏡 6.培養箱 7.液氮冰箱 (二)玻璃器皿 1.吸管(彎頭、直頭) 2.培養瓶 3.玻璃瓶(250ml、100ml) 4.廢液缸 (三)塑料器皿 1
實驗方法原理 在不附加任何條件下直接凍存細胞時,細胞內外環境中的水會結成冰晶,能導致細胞發生一系列變化,如機械損傷、電解質升高、滲透壓改變、脫水、pH 改變、蛋白質變性等等,最終導致細胞死亡。但如向細胞培養液中加入保護劑甘油或二甲基亞砜(DMSO),可使冰點降低,在緩慢的凍結條件下,能使細胞內水分在
方案20.1 冷凍細胞 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 細胞生長至對數晚期,以培養基制備高濃度細胞懸液,加入細胞保護劑,等份轉移至凍存管中,緩慢冷
一、材料 (一)儀器 1.凈化工作臺 2.離心機 3.恒溫水浴箱 4.冰箱(4℃、-20℃、-70℃) 5.倒置相差顯微鏡 6.培養箱 7.液氮冰箱 (二)玻璃器皿 1.吸管(彎頭、直頭) 2.培養瓶 3.玻璃瓶(250ml、100ml) 4.廢液缸 (三)塑料器皿 1