確定重組DNA的方向與結構,對突變進行定位、鑒定和比較研究。......閱讀全文
確定重組DNA的方向與結構,對突變進行定位、鑒定和比較研究。
生成互相獨立的若干組帶放射性標記的寡核苷酸,每組寡核苷酸都有固定的起點,但卻隨機終止于特定的一種或者多種殘基上。 由于DNA上的每一個堿基出現在可變終止端的機會均等,因此上述每一組產物都是一些寡核苷酸混合物,這些寡核苷酸的長度由某一種特定堿基在原DNA全片段上的位置所決定。 在可以區分長度僅
化學修飾法測序原理 化學試劑處理末段DNA片段,造成堿基的特異性切割,產生一組具有各種不同長度的DNA鏈的反應混合物,經凝膠電泳分離。化學切割反應:包括堿基的修飾,修飾的堿基從其糖環上轉移出去在失去堿基的糖環處DNA斷裂。 Sanger法測序的原理 就是利用一種DNA聚合酶來延伸結合在待定
化學修飾法測序原理化學試劑處理末段DNA片段,造成堿基的特異性切割,產生一組具有各種不同長度的DNA鏈的反應混合物,經凝膠電泳分離。化學切割反應:包括堿基的修飾,修飾的堿基從其糖環上轉移出去在失去堿基的糖環處DNA斷裂。Sanger法測序的原理就是利用一種DNA聚合酶來延伸結合在待定序列模板上的引物
生成互相獨立的若干組帶放射性標記的寡核苷酸,每組寡核苷酸都有固定的起點,但卻隨機終止于特定的一種或者多種殘基上。由于DNA上的每一個堿基出現在可變終止端的機會均等,因此上述每一組產物都是一些寡核苷酸混合物,這些寡核苷酸的長度由某一種特定堿基在原DNA全片段上的位置所決定。在可以區分長度僅差一個核苷酸
1. 取0.2 ml的PCR管,用記號筆編號,將管插在顆粒冰中,按下表加試劑: 所加試劑 測定模板管 標準對照管 BigDye Mix 1 μl 1 μl 待測的質粒DNA 1 μl - pGEM-3Zf (+) 雙鏈DNA - 1 μl 待測DNA的正向引物 1 μl - M13(
DNA測序(主要內容如下)·?????????Sequencing Gel Preparation·?????????Preparation of Templates?·?????????DNA Sequencing by the Dideoxy Method·?????????DNA Sequen
實驗方法原理 ABI ?PRISM 310型基因分析儀(即DNA測序儀),采用毛細管電泳技術取代傳統的聚丙烯酰胺平板電泳,應用該公司專利的四色熒光染料標記的ddNTP(標記終止物法),因此通過單引物PCR測序反應,生成的PCR產物則是相差1個堿基的3'末端為4種不同熒光染料的單鏈DN
? ? ? ? ? ? ? ? 自動測序法 雙脫氧鏈末端終止法 非同位素銀染 鳥槍法 Maxam-Gilbert化學修飾法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法
DNA測序可用于:(1)測定未知序列;(2)確定重組DNA的方向與結構;(3)對突變進行定位和鑒定比較研究。實驗方法原理ABI ?PRISM 310型基因分析儀(即DNA測序儀),采用毛細管電泳技術取代傳統的聚丙烯酰胺平板電泳,應用該公司專利的四色熒光染料標記的ddNTP(標記終止物法),因此通過單