蛋白質自動測序儀的工作原理
蛋白質測序儀主要檢測的是蛋白質一級結構（氨基酸序列），其基本原理沿用艾德蒙（Edman）化學降解法，這也是經典的蛋白質測序方法。利用 Edman化學降解法測定蛋白質或多肽N末端序列，在測定過程中，氨基酸殘基依次與異硫氰酸苯酯（PITC）作用，從蛋白質N末端依次切割下來，形成穩定的PTH氨基酸后進行分析和鑒定。Edman降解進行蛋白質與多肽序列分析是一個循環式的化學反應過程，包括偶聯、裂解、轉化三個主要步驟[1]： 偶聯在弱堿條件下，蛋白質或多肽鏈N末端殘基與PITC偶聯反應生成PTC-多肽。這一反應在45-48℃進行約15分鐘，并用過量的試劑使有機反應完全。 環化裂解在無水三氟醋酸（TFA）的作用下，可使靠近PTC基的氨基酸環化，肽鏈斷裂形成噻唑啉酮苯胺（ATZ）衍生物和一個失去末端氨基酸的剩余多肽。剩余多肽鏈可以進行下一次及后續的降解循環。 轉化 ATZ衍生物經25%TFA處理轉化為穩定的乙內酰苯硫脲氨基酸（PTH-......閱讀全文
蛋白質自動測序儀的工作原理
蛋白質測序儀主要檢測的是蛋白質一級結構（氨基酸序列），其基本原理沿用艾德蒙（Edman）化學降解法，這也是經典的蛋白質測序方法。利用 Edman化學降解法測定蛋白質或多肽N末端序列，在測定過程中，氨基酸殘基依次與異硫氰酸苯酯（PITC）作用，從蛋白質N末端依次切割下來，形成穩定的PTH氨基酸后進
蛋白質自動測序儀的發展歷史
1953年，瑞典化學家Edman采用異硫氰酸苯酯法測定蛋白質的N端序列，為氨基酸自動測序奠定了基礎。 1967年，Edman和Begg根據異硫氰酸苯酯法測定原理設計了第一臺蛋白質自動測序儀（旋轉杯蛋白質測序儀），為蛋白質自動測序以及蛋白質自動測序儀的商品化生產提供了理論支持和樣機。 1971
蛋白質自動測序儀的基本結構
蛋白質自動測序儀結構非常復雜，基本組成構件包括反應器、轉換器、進樣器、氨基酸分析系統和信息軟件處理系統[1]。 反應器反應器中進行 Edman化學降解反應中偶聯反應和環化裂解反應。在偶聯反應之前有一個樣品固定過程，即將蛋白質樣品固定在纖維板上或將轉印有蛋白質斑點的聚偏二氟乙烯膜（FVDF）放置
蛋白質自動測序儀的日常維護
流動相的選擇采用與檢測器相匹配且黏度小的“HPLC”級溶劑，經過蒸餾和0.45μm的過濾去除纖維毛和未溶解的機械顆粒等，經過0.2μm的過濾可除去有紫外吸收的雜質對試樣有適宜的溶解度。避免使用會引起柱效損失或保留特性變化的溶劑[1]。 水的等級需用純化水，因為不純物的存在會增加去離子的吸光率，
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