TaqDNA聚合酶的基本信息
中文名稱Taq DNA 聚合酶英文名稱Taq DNA polymerase定 義編號:EC 2.7.7.7。存在于水生嗜熱菌(Thermus aquaticus)的嗜熱DNA聚合酶,可在74℃復制DNA,在95℃仍具有酶活力。該酶可在離體條件下,以DNA為模板,延伸引物,合成雙鏈DNA。這個酶只有5′→3′DNA聚合酶活性和5′→3′的外切酶活性,缺少3′→5′的外切酶活性。應用學科生物化學與分子生物學(一級學科),酶(二級學科)......閱讀全文
Taq-DNA-聚合酶的基本信息
中文名稱Taq DNA 聚合酶英文名稱Taq DNA polymerase定 義編號:EC 2.7.7.7。存在于水生嗜熱菌(Thermus aquaticus)的嗜熱DNA聚合酶,可在74℃復制DNA,在95℃仍具有酶活力。該酶可在離體條件下,以DNA為模板,延伸引物,合成雙鏈DNA。這個酶只有
Taq-DNA-聚合酶的基本信息
中文名稱Taq DNA 聚合酶英文名稱Taq DNA polymerase定 義編號:EC 2.7.7.7。存在于水生嗜熱菌(Thermus aquaticus)的嗜熱DNA聚合酶,可在74℃復制DNA,在95℃仍具有酶活力。該酶可在離體條件下,以DNA為模板,延伸引物,合成雙鏈DNA。這個酶只有
PCR技術(三):Taq-DNA聚合酶
Taq DNA聚合酶是從一種水生棲熱菌(Thermusaquaticus)yT1株分離提取的.yT是 一種嗜熱真菌,能在70~75℃生長.該菌是1969年從美國黃石國家森林公園火山溫泉 中分離的.(一)酶活性與熱穩定性 該酶基因全長2496個堿基,編碼832個氨基酸,酶蛋白分子為 94KDa.其比
關于PCR,你知道多少?(四)Taq-DNA聚合酶
在PCR反應中,毫無疑問的DNA聚合酶是最關鍵的因素。PCR最初使用的DNA聚合酶是大腸桿菌DNA聚合酶 I的Klenow片段。但該酶存在很多缺陷,使之不能廣為應用,比如:熱穩定性差,每次DNA熱變性后大部分酶都被滅活,需要重新加入,每個循環都要重新加入;Klenow酶反應溫度較低,引物和模板容易形
Taq-DNA連接酶的基本信息
中文名稱Taq DNA連接酶英文名稱Taq DNA ligase定 義編號:EC 6.5.1.1。存在于水生嗜熱菌(Thermus aquaticus)中的DNA連接酶,催化可與目標DNA完全雜交的兩條相鄰寡核苷酸的5′-PO4和3′-OH的連接反應。應用學科生物化學與分子生物學(一級學科),酶(
Taq-DNA連接酶的基本信息
中文名稱Taq DNA連接酶英文名稱Taq DNA ligase定 義編號:EC 6.5.1.1。存在于水生嗜熱菌(Thermus aquaticus)中的DNA連接酶,催化可與目標DNA完全雜交的兩條相鄰寡核苷酸的5′-PO4和3′-OH的連接反應。應用學科生物化學與分子生物學(一級學科),酶(
用-Taq-DNA-聚合酶進行雙脫氧測序反應實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 去離子蒸餾水 ddNTP dNTP 甲酰胺加樣緩沖液。酶和緩沖液。Taq 酶或類似的熱穩定 DNA 聚合酶 Taq 酶稀釋緩沖液
用-Taq-DNA-聚合酶進行雙脫氧測序反應實驗
試劑、試劑盒 去離子蒸餾水ddNTPdNTP甲酰胺加樣緩沖液。酶和緩沖液。Taq 酶或類似的熱穩定 DNA 聚合酶Taq 酶稀釋緩沖液核酸和寡核苷酸寡核苷酸引物模板 DNA(100ug ul) 溶于 TE 中放射性化合物5'32P 標記的寡核苷酸引物儀器、耗材 微量離心管(0.5 ml) 或
用-Taq-DNA-聚合酶進行雙脫氧測序反應實驗
熱穩定 DNA 聚合酶除了在 PCR 反應中應用外,還可用來替代測序酶或 Klenow 片段進行雙脫氧鏈終止法測序。它在高溫下(70°C) 進行等溫鏈終止反應的能力可減少測序反應中由于模板 DNA 上引物假結合位點與引物退火錯配產生的問題,它還可用于富含二級結構模板的測序。本實驗源于分子克隆實驗指南
Taq-DNA聚合酶(with-MgCl2-in-Buffer)使用說明
『注意事項』1.? ? 長期儲存(非頻繁使用)于-70oC;每天或每周使用儲存于-20oC。盡量避免多次凍融,勿暴露在溫度波動較大之處,這些波動對產品的穩定性有一定影響。2.? ? 建議在100?l反應液中,酶的使用量為1~2.5?l。過多酶量和過長的延伸時間可能會引起非特異擴增條帶。3.? ? 為
Mlu-DNA聚合酶的基本信息
中文名稱Mlu DNA聚合酶英文名稱Mlu DNA polymerase定 義來自藤黃微球菌(Micrococcus luteus)的DNA聚合酶。應用學科生物化學與分子生物學(一級學科),酶(二級學科)
Tth-DNA聚合酶的基本信息
中文名稱Tth DNA聚合酶英文名稱Tth DNA polymerase定 義編號:EC 2.7.7.7。存在于嗜熱細菌(Thermus thermophilus) 的耐熱DNA聚合酶,有逆轉錄活性。應用學科生物化學與分子生物學(一級學科),酶(二級學科)
Pfu-DNA聚合酶的基本信息
中文名稱Pfu DNA聚合酶英文名稱Pfu DNA polymerase定 義存在于嗜熱古菌(Pyrococcus furiosus) 的耐熱DNA聚合酶,兼具5′→3′DNA聚合酶活性及3′→5′外切酶活性。應用學科生物化學與分子生物學(一級學科),酶(二級學科)
Pfu-DNA聚合酶的基本信息
中文名稱Pfu DNA聚合酶英文名稱Pfu DNA polymerase定 義存在于嗜熱古菌(Pyrococcus furiosus) 的耐熱DNA聚合酶,兼具5′→3′DNA聚合酶活性及3′→5′外切酶活性。應用學科生物化學與分子生物學(一級學科),酶(二級學科)
Tth-DNA聚合酶的基本信息
中文名稱Tth DNA聚合酶英文名稱Tth DNA polymerase定 義編號:EC 2.7.7.7。存在于嗜熱細菌(Thermus thermophilus) 的耐熱DNA聚合酶,有逆轉錄活性。應用學科生物化學與分子生物學(一級學科),酶(二級學科)
Mlu-DNA聚合酶的基本信息
中文名稱Mlu DNA聚合酶英文名稱Mlu DNA polymerase定 義來自藤黃微球菌(Micrococcus luteus)的DNA聚合酶。應用學科生物化學與分子生物學(一級學科),酶(二級學科)?
Vent-DNA聚合酶的基本信息
中文名稱Vent DNA聚合酶英文名稱Vent DNA polymerase定 義編號:EC 2.7.7.7。從極端嗜熱細菌(Thermococcus litoralis)中提純的耐熱DNA聚合酶,有3′→5′外切酶活性。用此酶催化的PCR產物為平端。應用學科生物化學與分子生物學(一級學科),酶(
Vent-DNA聚合酶的基本信息
中文名稱Vent DNA聚合酶英文名稱Vent DNA polymerase定 義編號:EC 2.7.7.7。從極端嗜熱細菌(Thermococcus litoralis)中提純的耐熱DNA聚合酶,有3′→5′外切酶活性。用此酶催化的PCR產物為平端。應用學科生物化學與分子生物學(一級學科),酶(
DNA聚合酶的基本信息和共性
DNA聚合酶,又稱DNA依賴的DNA聚合酶(DNA—dependent DNA polymerase,DNA pol),它是以親代DNA為模板,催化底物dNTP分子聚合形成子代DNA的一類酶。此酶最早是美國科學家Arthur Komberg于1957年在大腸桿菌中發現的,被稱為DNA聚合酶Ⅰ(DNA
DNA聚合酶的基本信息和特性
也稱耐高溫DNA聚合酶。1988年,Saiki從嗜熱水生真菌Thermus aquatics YT-1株中分離得到,該菌株于1969年從美國黃石國家森林公園火山溫泉中分離出。特性良好的熱穩定性;70℃ 2h,殘留90%活性;93℃ 2h,殘留60%活性;94℃ 2h,殘留40%活性。5’→3’聚合酶
DNA聚合酶的特性
良好的熱穩定性;70℃ 2h,殘留90%活性;93℃ 2h,殘留60%活性;94℃ 2h,殘留40%活性。5'→3'聚合酶活性,對dATP有優先聚合活性;5'→3'外切酶活性;無3'→5'外切酶活性。
DNA聚合酶的用途
聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction, PCR)。Taq酶擴增的PCR產物,3'末端總是帶有1個非模板依賴型的突出堿基,而這個堿基幾乎總是A,因為Taq酶對dATP具有優先聚合活性,故可用T載體克隆。
DNA聚合酶的定義
真核細胞有5種DNA聚合酶,分別為DNA聚合酶α(定位于胞核,參與復制引發,不具有5'-3'外切酶活性及3'-5'外切酶活性,有5'-3'聚合酶活性),β(定位于核內,參與高保真度復制,不具有5'-3'外切酶活性,其中疑似存在5
DNA聚合酶的特性
DNA聚合酶有多種,E.coli就有三種。通常DNA聚合酶具有以下共同特點:?①需要DNA模板,因此這類酶又稱為依賴DNA的DNA聚合酶;②需要RNA或DNA作為引物(primer),即DNA聚合酶不能從頭催化;?③催化dNTP加到引物的3'-OH末端,其速率為1000nt/min,因而DN
DNA聚合酶的功能
[1] 聚合作用:在引物RNA'-OH末端,以dNTP為底物,按模板DNA上的指令由DNApolⅠ逐個將核苷酸 加上去,就是DNApolⅠ的聚合作用。 酶的專一性主要表現為新進入的脫氧核苷酸必須與模板DNA配對時才有 催化作用。dNTP進入結合位點后,可能使酶的 構象發生變化,促進3&
DNA聚合酶的概述
DNA聚合酶(DNA polymerase)是 細胞復制DNA的重要作用酶。DNA聚合酶 , 以DNA為復制模板,從將DNA由5'端點開始復制到3'端的酶。DNA聚合酶的主要活性是催化DNA的合成(在具備模板、 引物、dNTP 等的情況下)及其相輔的活性。 真核細胞有5種DNA
DNA聚合酶的發現
在50年代的中期,A. Kornberg和他的同事們就想到DNA的復制必然是一種酶的催化作用,于是決心分離出這種酶并研究其結構和作用機制。為了達到這個目的,他們分離的蛋白,然后加到體外合成系統中即 同位素標記的dNTP、Mg2+及模板DNA,經過大量的工作,于1956年終于發現了DNA聚合酶Ⅰ(
DNA聚合酶的功能
1)通過核苷酸聚合反應,使DNA鏈沿5’→3’方向延長(DNA聚合酶活性)[1] 2)催化由3’端水解DNA鏈(3’→ 5’核酸外切酶活性,用于切除錯配的堿基)[1] 3)催化由5’端水解DNA鏈(5’→ 3’核酸外切酶活性,用于切除引物)[1] 4)催化由3’端使DNA鏈發生焦磷酸解
DNA聚合酶的缺點
缺點無3'→5'閱讀校正功能,在PCR擴增過程可引起錯配,30次循環錯配率約0.25%。措施:選擇高保真Taq酶,如Pfu。原因:Pfu具有3'→5'外切酶活性。注意:Pfu擴增產物為平末端。
DNA聚合酶的應用
E.coli的DNA pol Ⅰ涉及DNA損傷修復,在半保留復制中起輔助的作用。DNA polⅡ在修復損傷中也具有重要的作用。DNA polⅢ是一種多亞基的蛋白質,在DNA新鏈的從頭合成中起復制酶的作用。復制的忠實性問題會影響到翻譯的精確性,這種忠實性主要依賴于堿基的特異性配對。據估計每個堿基對將有