免疫印跡法所需試劑有哪些?
1、SDS-PAGE試劑:見電泳實驗。2、勻漿緩沖液:1.0M Tris-HCl(pH 6.8)1.Oml;10%SDS 6.0ml;β-巰基乙醇 0.2ml;ddH2O 2.8ml。3、轉膜緩沖液:甘氨酸 2.9g;Tris 5.8g;SDS 0.37g;甲醇200ml;加ddH2O定容至1000ml。4、0.01M PBS(pH7.4):NaCl 8.0g;KCl 0.2g;Na2HPO4 1.44g;KH2PO4 0.24g;加ddH2O至1000ml。5、膜染色液:考馬斯亮蘭 0.2g;甲醇80ml;乙酸2ml;ddH2O118 ml。包被液(5%脫脂奶粉,現配):脫脂奶粉1.0g 溶于20ml的0.01M PBS中。6、顯色液:DAB 6.0mg;0.01M PBS 10.0ml;硫酸鎳胺 0.1ml;H202 1.0μl。......閱讀全文
免疫印跡法所需試劑有哪些?
1、SDS-PAGE試劑:見電泳實驗。2、勻漿緩沖液:1.0M Tris-HCl(pH 6.8)1.Oml;10%SDS 6.0ml;β-巰基乙醇?0.2ml;ddH2O 2.8ml。3、轉膜緩沖液:甘氨酸?2.9g;Tris 5.8g;SDS 0.37g;甲醇200ml;加ddH2O定容至1000
免疫印跡法試驗所需試劑
1、SDS-PAGE試劑:見電泳實驗。2、勻漿緩沖液:1.0M Tris-HCl(pH 6.8)1.Oml;10%SDS 6.0ml;β-巰基乙醇?0.2ml;ddH2O 2.8ml。3、轉膜緩沖液:甘氨酸?2.9g;Tris 5.8g;SDS 0.37g;甲醇200ml;加ddH2O定容至1000
蛋白質印跡法所需試劑有哪些?
1、SDS-PAGE試劑:見電泳實驗。2、勻漿緩沖液:1.0M Tris-HCl(pH 6.8)1.0ml;10%SDS 6.0ml;β-巰基乙醇 0.2ml;ddH2O 2.8ml。3、轉膜緩沖液:甘氨酸 2.9g;Tris 5.8g;SDS 0.37g;甲醇200ml;加ddH2O定容至1000
DNA印跡法所需儀器試劑
儀器1電熱真空干燥箱?2硝酸纖維素濾膜或尼龍膜?3大方瓷盤、帶蓋方盤、玻璃板?4濾紙、吸水紙、保鮮膜、蠟膜Parafilm、一次性手套等?5刀片、刻度吸管、鑷子、剪刀、lkg重物?材料電泳分離DNA的瓊脂糖凝膠試劑1 酸變性液:0.25mol/L HCl, 用分析純的鹽酸12Mol/L稀釋?2堿變性
免疫印跡法有哪些優點
1、 濕的固定化基質膜柔韌, 易于操作; 2 、固定化的生物大分子可均一的與各種免疫探針接近, 不會象凝膠那樣受孔徑阻隔; 3、 免疫印跡分析只需少量試劑; 4、 孵育、洗滌的時間明顯減短; 5、可同時制作多個拷貝, 用于多種分析和鑒定; 6、結果以圖譜形式可長期保存; 7、 免疫探
DNA印跡法所需的儀器試劑介紹
1電熱真空干燥箱?2硝酸纖維素濾膜或尼龍膜?3大方瓷盤、帶蓋方盤、玻璃板?4濾紙、吸水紙、保鮮膜、蠟膜Parafilm、一次性手套等5刀片、刻度吸管、鑷子、剪刀、lkg重物 二、材料 電泳分離DNA的瓊脂糖凝膠
免疫印跡法試劑準備
1、SDS-PAGE試劑:見電泳實驗。 2、勻漿緩沖液:1.0M Tris-HCl(pH 6.8)1.Oml;10%SDS 6.0ml;β-巰基乙醇 0.2ml;ddH2O 2.8ml。 3、轉膜緩沖液:甘氨酸2.9g;Tris 5.8g;SDS 0.37g;甲醇200ml;加ddH2O定容
免疫印跡法的操作步驟有哪些
一蛋白質樣品獲得:細菌誘導表達后,可通過電泳上樣緩沖液直接裂解細胞,真核細胞加勻漿緩沖液,機械或超聲波室溫勻漿0.5-1min。然后4℃,13,000r離心15min。取上清液作為樣品。 二電泳:制備電泳凝膠,進行SDS-PAGE。 三轉移:(半干式轉移) 1、電泳結束后將膠條割至合適大小
免疫印跡法實驗的試劑準備
1、SDS-PAGE試劑:見電泳實驗。 2、勻漿緩沖液:1.0M Tris-HCl(pH 6.8)1.Oml;10%SDS 6.0ml;β-巰基乙醇 0.2ml;ddH2O 2.8ml。 3、轉膜緩沖液:甘氨酸 2.9g;Tris 5.8g;SDS 0.37g;甲醇200ml;加ddH2O定
wb免疫印跡法的主要顯色方法有哪些
Western免疫印跡(WesternBlot)是將蛋白質轉移到膜上,然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白,可用相應抗體作為一抗進行檢測,對新基因的表達產物,可通過融合部分的抗體檢測。 western顯色的方法主要有以下幾種: i.放射自顯影 ii.底物化學發光ECL iii.底物熒光E
Western免疫印跡有哪些分類
western顯色的方法主要有以下幾種: i.放射自顯影 ii.底物化學發光ECL iii.底物熒光ECF iv.底物DAB呈色 現常用的有底物化學發光ECL和底物DAB呈色,體同水平和實驗條件的是用第一種方法,目前發表文章通常是用底物化學發光ECL。只要買現成的試劑盒就行,操作也比較
免疫印跡法
Western免疫印跡(Western Blot)是將蛋白質轉移到膜上,然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白,可用相應抗體作為一抗進行檢測,對新基因的表達產物,可通過融合部分的抗體檢測。一、原理與Southern或Northern雜交方法類似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳,被
免疫印跡法過程
免疫印跡法 是將蛋白質轉移到膜上,然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白,可用相應抗體作為一抗進行檢測,對新基因的表達產物,可通過融合部分的抗體檢測。 1、SDS-PAGE試劑:見電泳實驗。2、勻漿緩沖液:1.0M Tris-HCl(pH 6.8)1.Oml;10%SDS 6.0ml;β-巰基乙醇 0
離子色譜法測定硫酸霧-所需試劑有哪些?
①~②同鉻酸鋇分光光度法①~②。③去離子水電導小于1μS/cm。凡進入離子色譜儀的水,須經過0.45μm微孔濾膜過濾。④淋洗貯備液,碳酸鈉溶液C(Na2CO3)=0.400mol/L:稱取21.198g無水碳酸鈉(優級純),溶解于水,移入500ml容量瓶中,用水稀釋至標線,搖勻。⑤淋洗液,碳酸鈉溶液
常規的PCR反應體系所需試劑和儀器有哪些?
1.常規的PCR反應體系所需試劑?①高壓過的超純水(高壓的目的是使其中的 DNase失活,以免降解模板DNA);?②PCR緩沖液(選用與所用聚合酶對應的緩沖液) ;③4種dNTP混合物(每種dNTP的濃度為2.5mmol/L);?④引物(引物合成后,用超純水稀釋為10mmol/L);?⑤熱穩定的DN
免疫印跡法和免疫捕獲法的區別
免疫印跡實驗和酶聯免疫的區別如下:免疫印記一般是要把檢測的樣品轉到膜上,再用抗體檢測酶聯免疫一般是把抗體固定在支持物上,再與要檢測的樣品反應,目標物就會與抗體結合而留在支持物上。WB所檢測的一般是抗原,而Elisa抗原抗體都可以檢測。WB只能用抗體去檢測你的蛋白樣品。ELISA可以固定抗原也可以固定
免疫印跡法的階段
免疫印跡法分三個階段進行.第一階段為SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE):抗原等蛋白樣品經SDS處理后帶陰電荷,在聚丙烯酰胺凝膠中從陰極向陽極泳動,分子量越小,泳動速度就越快.此階段分離效果肉眼不可見(只有在染色后才顯出電泳區帶).第二階段為電轉移:將在凝膠中已經分離的條帶轉移至硝酸纖維素
免疫印跡法檢測原理
免疫印跡法是在蛋白質電泳分離和抗原抗體檢測的基礎上發展起來的一項檢測蛋白質的技術,它將SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳的高分辨力與抗原抗體反應的高特異性相結合。第一階段為SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)。抗原等蛋白樣品經SDS處理后帶負電荷,在聚丙烯酰胺凝膠中從陰極向陽極泳動,分子量越小,泳
什么是免疫印跡法
免疫印跡法 (Western blotting) 是一種將高分辨率凝膠電泳和免疫化學分析技術相結合的雜交技術。免疫印跡法具有分析容量大、敏感度高、特異性強等優點,是檢測蛋白質特性、表達與分布的一種最常用的方法,如組織抗原的定性定量檢測、多肽分子的質量測定及病毒的抗體或抗原檢測等。 免疫印跡法(i
什么是免疫印跡法?
免疫印跡法 (Western Blot) 是一種將高分辨率凝膠電泳和免疫化學分析技術相結合的雜交技術。免疫印跡法具有分析容量大、敏感度高、特異性強等優點,是檢測蛋白質特性、表達與分布的一種最常用的方法,如組織抗原的定性定量檢測、多肽分子的質量測定及病毒的抗體或抗原檢測等。免疫印跡法 (immun
免疫酶染色試驗_免疫印跡法
免疫印跡法 (以檢測流行性出血熱病毒結構蛋白和 NP 核蛋白為例說明)實驗方法原理免疫印跡法 是將電泳與免疫酶染色結合起來的一種方法。它先經電泳 (SDS--PAGE)將病毒結構蛋白進行分離,通過轉印將被分離的各區帶原位轉移到硝酸纖維素膜 (nitrocellulose membrane, NC 膜
蛋白質印跡法所需樣本的制備方法
1、單層貼壁細胞總蛋白的提取:(1)倒掉培養液,并將瓶倒扣在吸水紙上使吸水紙吸干培養液(或將瓶直立放置一會兒使殘余培養液流到瓶底然后再用移液器將其吸走)。(2)每瓶細胞加3ml 4℃預冷的PBS(0.01M pH7.2~7.3)。平放輕輕搖動1min洗滌細胞,然后棄去洗液。重復以上操作兩次,共洗細胞
人體所需所需的脂肪酸有哪些?
人們所需的脂肪酸有三類:多元不飽和脂肪酸、單元不飽和脂肪酸和飽和脂肪酸。我們常用的食用油通常都含人體需要的三種脂肪酸。
免疫印跡法的檢測原理
免疫印跡法是在蛋白質電泳分離和抗原抗體檢測的基礎上發展起來的一項檢測蛋白質的技術,它將SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳的高分辨力與抗原抗體反應的高特異性相結合。第一階段為SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)。抗原等蛋白樣品經SDS處理后帶負電荷,在聚丙烯酰胺凝膠中從陰極向陽極泳動,分子量越小,泳
免疫印跡法試驗操作步驟
一蛋白質樣品獲得:細菌誘導表達后,可通過電泳上樣緩沖液直接裂解細胞,真核細胞加勻漿緩沖液,機械或超聲波室溫勻漿0.5-1min。然后4℃,13,000r離心15min。取上清液作為樣品。二電泳:制備電泳凝膠,進行SDS-PAGE。三轉移:(半干式轉移)1、電泳結束后將膠條割至合適大小,用轉膜緩沖液平
分子印跡技術有哪些特點?
1.預定性,即它可以根據不同的目的制備不同的MIPs,以滿足各種不同的需要。 2.識別性,即MIPS是按照模板分子定做的,可專一地識別印跡分子。 3.實用性,即它可以與天然的生物分子識別系統如酶與底物、抗原與抗體、受體與激素相比擬,但由于它是由化學合成的方法制備的,因此又有天然分子識別系統所
DNA印跡法的實驗器材和試劑
器材 1、電熱真空干燥箱 2、硝酸纖維素濾膜或尼龍膜 3、大方瓷盤、帶蓋方盤、玻璃板 4、濾紙、吸水紙、保鮮膜、蠟膜Parafilm、一次性手套等 5、刀片、刻度吸管、鑷子、剪刀、lkg重物 二、材料 電泳分離DNA的瓊脂糖凝膠 試劑 1、酸變性液:0.25mol/L HCl, 用
蛋白質印跡法試劑準備
1、SDS-PAGE試劑:見電泳實驗。 2、勻漿緩沖液:1.0M Tris-HCl(pH 6.8)1.0ml;10%SDS 6.0ml;β-巰基乙醇 0.2ml;ddH2O 2.8ml。 3、轉膜緩沖液:甘氨酸 2.9g;Tris 5.8g;SDS 0.37g;甲醇200ml;加ddH2O定
Western印跡法(試劑配制和操作步驟)
Western印跡法(試劑配制和操作步驟) 這種技術是把電泳分離的組分從凝膠轉移到一種固相支持體,并以針對特定氨基酸序列的特異性試劑作為探針檢測之。 Western使用的探針是抗體,它與附著于固相支持體的靶蛋白所呈現的抗原表位發生特異性反應。這種技術的作用是對非放射性標記蛋白組成的復雜混合
免疫PCR法檢測有哪些特點
免疫PCR法檢測有哪些特點?:免疫PCR綜合了固相免疫反應和PCR兩者的特點。因而在保證免疫測定特異性的同時,又具有極高的檢測靈敏度。免疫PCR的基本原理與執業護士網常規標記免疫技術相似,只不過在免疫PCR中所用的抗原或抗體標記物為DNA,在固相免疫結合反應完成后,再采用PCR技術對標記DNA進行擴