蛋白質印跡法的測定蛋白質含量
1、制作標準曲線（1 ）從－20℃取出1mg/ml BSA，室溫融化后，備用。（2） 取18個1.5ml離心管，3個一組，分別標記為0μg，2.5μg，5.0μg，10.0μg，20.0μg，40.0μg。（3 ）按下表在各管中加入各種試劑。0μg2.5μg5.0μg10.0μg20.0μg40.0μg1mg/ml BSA－2.5μl5.0μl10.0μl20.0μl40.0μl0.15mol/L NaCl100μl97.5μl95.0μl90.0μl80.0μl60.0μlG250考馬斯亮藍溶液1ml1ml1ml1ml1ml1ml（4）混勻后，室溫放置2min。在生物分光光度計（Bio－Photometer，Eppentoff）上比色分析。2、檢測樣品蛋白含量（1）取足量的1.5ml離心管，每管加入4℃儲存的考馬斯亮藍溶液1ml。室溫放置30min后即可用于測蛋白。（2 ）取一管考馬斯亮藍加0.15mol/L&nbs......閱讀全文
蛋白質印跡法的測定蛋白質含量
1、制作標準曲線（1 ）從－20℃取出1mg/ml?BSA，室溫融化后，備用。（2） 取18個1.5ml離心管，3個一組，分別標記為0μg，2.5μg，5.0μg，10.0μg，20.0μg，40.0μg。（3 ）按下表在各管中加入各種試劑。0μg2.5μg5.0μg10.0μg20.0μg40.0
蛋白質印跡法含量測定介紹
1、制作標準曲線 （1 ）從－20℃取出1mg/ml BSA，室溫融化后，備用。 （2） 取18個1.5ml離心管，3個一組，分別標記為0μg，2.5μg，5.0μg，10.0μg，20.0μg，40.0μg。 （3 ）在各管中加入各種試劑。 （4）混勻后，室溫放置2min。在生物分光光
蛋白質印跡法的含量測定步驟介紹
1、制作標準曲線（1 ）從－20℃取出1mg/ml BSA，室溫融化后，備用。（2） 取18個1.5ml離心管，3個一組，分別標記為0μg，2.5μg，5.0μg，10.0μg，20.0μg，40.0μg。（3 ）按下表在各管中加入各種試劑。0μg2.5μg5.0μg10.0μg20.0μg40.0
蛋白質印跡法
值得一提的是，western blot這個名稱的由來很有意思。最開始做印跡工作的是一個叫做Edwin Southern的科學家，但印跡的對象是DNA鏈，他把這種技術稱為Southern blot，后來類似的出現了兩個過程相似，但是對象不同的印跡方法，一個針對RNA，一個針對蛋白質，人們分別把這兩種技
蛋白質印跡法
蛋白質印跡法（免疫印跡試驗）即Western Blot。它是分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中常用的一種實驗方法。其基本原理是通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細胞或生物組織樣品進行著色。通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質在所分析的細胞或組織中表達情況的信息。蛋白質印跡法是由瑞士米歇爾弗雷德里
蛋白質定量/蛋白質含量的測定(LOWRY法)
實驗概要運用LOWRY法測定蛋白質的含量。實驗原理Lowry法是雙縮脲法和福林酚法的結合與發展，其原理是：蛋白質溶液用堿性銅溶液處理，形成銅-蛋白質的絡合鹽，再加入酚試劑后，除使肽鏈中酪氨酸、色氨酸和半胱氨酸等顯色外，還使雙縮脲法中肽鍵、堿性銅的顯色效果更強烈。因此，Lowry法的顯色效果比單獨使用
Bradford法蛋白質含量的測定
原理：這一方法基于考馬斯亮藍G-250 有紅藍兩種不同的形式。在一定濃度的乙醇及酸性條件下，可配成淡紅色的溶液，當與蛋白質結合后，產生藍色化合物，反應迅速而穩定。反應化合物在 465-595nm處有最大的光吸收值，化合物顏色的深淺與蛋白濃度的高低成正比關系，因此可檢測595nm的光吸收值的大
蛋白質印跡法分類
Western Blot顯色的方法主要有以下幾種：i. 放射自顯影ii. 底物化學發光ECLiii. 底物熒光ECFiv. 底物DAB呈色現常用的有底物化學發光ECL和底物DAB呈色，體同水平和實驗條件的是用第一種方法，發表文章通常是用底物化學發光ECL。只要買現成的試劑盒就行，操作也比較簡單，原理
蛋白質印跡法原理
與Southern Blot或Northern Blot雜交方法類似，但Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質，“探針”是抗體，“顯色”用標記的二抗。經過PAGE（聚丙烯酰胺凝膠電泳）分離的蛋白質樣品，轉移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價鍵形式吸附
蛋白質印跡法的原理
與Southern Blot或Northern Blot雜交方法類似，但Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質，“探針”是抗體，“顯色”用標記的二抗。經過PAGE(聚丙烯酰胺凝膠電泳)分離的蛋白質樣品，轉移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價鍵形式吸附
蛋白質印跡法的分類
顯色的方法主要有以下幾種：i. 放射自顯影ii.?底物化學發光ECLiii. 底物熒光ECFiv. 底物DAB呈色現常用的有底物化學發光ECL和底物DAB呈色，體同水平和實驗條件的是用第一種方法，發表文章通常是用底物化學發光ECL。只要買現成的試劑盒就行，操作也比較簡單，原理如下（二抗用HRP標記）
蛋白質印跡法的原理
與Southern Blot或Northern Blot雜交方法類似，但Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質，“探針”是抗體，“顯色”用標記的二抗。經過PAGE(聚丙烯酰胺凝膠電泳)分離的蛋白質樣品，轉移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價鍵形式吸附
蛋白質印跡法的概念
蛋白質印跡法（免疫印跡試驗）即Western Blot。它是分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中常用的一種實驗方法。其基本原理是通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細胞或生物組織樣品進行著色。通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質在所分析的細胞或組織中表達情況的信息。蛋白質印跡法是由瑞士米歇爾弗雷德里
蛋白質印跡法的原理
與Southern Blot或Northern Blot雜交方法類似,但Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳,被檢測物是蛋白質,“探針”是抗體,“顯色”用標記的二抗。經過PAGE(聚丙烯酰胺凝膠電泳)分離的蛋白質樣品,轉移到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜)上,固相載體以非共價鍵形式吸附
蛋白質含量測定實驗——Bradford法
蛋白質含量測定實驗可以用于：（1）測定蛋白質濃度；（2）檢測所提取的蛋白質含量。實驗材料蛋白質試劑、試劑盒牛血清NaCl考馬斯亮藍儀器、耗材分光光度計離心機實驗步驟1. ?分別在兩組微量離心管中各加入0.5 mg/ml 牛血清白蛋白，以 0.15 mmol/l NaCl補足至100 ul，同時以兩管
蛋白質印跡法試劑準備
1、SDS-PAGE試劑：見電泳實驗。 2、勻漿緩沖液：1.0M Tris-HCl(pH 6.8)1.0ml；10%SDS 6.0ml；β-巰基乙醇 0.2ml；ddH2O 2.8ml。 3、轉膜緩沖液：甘氨酸 2.9g；Tris 5.8g；SDS 0.37g；甲醇200ml；加ddH2O定
什么是蛋白質印跡法？
蛋白質印跡法(免疫印跡試驗)即Western Blot。它是分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中常用的一種實驗方法。其基本原理是通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細胞或生物組織樣品進行著色。通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質在所分析的細胞或組織中表達情況的信息。
蛋白質印跡法操作步驟
試劑準備1、SDS-PAGE試劑：見電泳實驗。2、勻漿緩沖液：1.0M Tris-HCl(pH 6.8)1.0ml；10%SDS 6.0ml；β-巰基乙醇 0.2ml；ddH2O 2.8ml。3、轉膜緩沖液：甘氨酸 2.9g；Tris 5.8g；SDS 0.37g；甲醇200ml；加ddH2O定容至
蛋白質印跡法的技術分類
Western Blot顯色的方法主要有以下幾種：i.?放射自顯影ii.?底物化學發光ECLiii. 底物熒光ECFiv. 底物DAB呈色現常用的有底物化學發光ECL和底物DAB呈色，體同水平和實驗條件的是用第一種方法，發表文章通常是用底物化學發光ECL。只要買現成的試劑盒就行，操作也比較簡單，原理
蛋白質印跡法的相關介紹
蛋白質印跡法（免疫印跡試驗）即Western Blot。它是分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中常用的一種實驗方法。其基本原理是通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細胞或生物組織樣品進行著色。通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質在所分析的細胞或組織中表達情況的信息。 蛋白質印跡法是由瑞士米歇爾
蛋白質印跡法的技術原理
與Southern Blot或Northern Blot雜交方法類似，但Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質，“探針”是抗體，“顯色”用標記的二抗。經過PAGE（聚丙烯酰胺凝膠電泳）分離的蛋白質樣品，轉移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價鍵形式吸附
蛋白質印跡法實驗的要點
1、樣品質量。 所抽取樣品的蛋白含量，蛋白變性是否充分等等，還有，蛋白樣品的PH值是否在7~8之間。這會直接影響到樣品濃縮的效果。此外，蛋白樣品是否降解、目的蛋白是否已抽取充分都會對最終結果的可靠性有影響。 2、凝膠質量。 不連續SDS-PAGE膠對凝膠的要求較高，分離膠的PH值應在8.8
蛋白質印跡法的樣品制備
1、單層貼壁細胞總蛋白的提取： （1）倒掉培養液，并將瓶倒扣在吸水紙上使吸水紙吸干培養液（或將瓶直立放置一會兒使殘余培養液流到瓶底然后再用移液器將其吸走）。 （2）每瓶細胞加3ml 4℃預冷的PBS（0.01M pH7.2～7.3）。平放輕輕搖動1min洗滌細胞，然后棄去洗液。重復以上操作兩
蛋白質印跡法的操作步驟
試劑準備1、SDS-PAGE試劑:見電泳實驗。2、勻漿緩沖液:1.0M Tris-HCl(pH 6.8)1.0ml;10%SDS 6.0ml;β-巰基乙醇 0.2ml;ddH2O 2.8ml。3、轉膜緩沖液:甘氨酸 2.9g;Tris 5.8g;SDS 0.37g;甲醇200ml;加ddH2O定容至
蛋白質印跡法的操作步驟
1.SDS-PAGE試劑:見電泳實驗。2.勻漿緩沖液：1.0M Tris-HCl(pH 6.8)1.Oml；10%SDS 6.0ml；β-巰基乙醇 0.2ml；ddH2O 2.8ml。3.轉膜緩沖液：甘氨酸 2.9g；Tris 5.8g；SDS 0.37g；甲醇200ml；加ddH2O定容至1000
蛋白質印跡法的操作步驟
試劑準備1、SDS-PAGE試劑：見電泳實驗。2、勻漿緩沖液：1.0M?Tris-HCl(pH 6.8)1.0ml；10%SDS?6.0ml；β-巰基乙醇?0.2ml；ddH2O 2.8ml。3、轉膜緩沖液：甘氨酸?2.9g；Tris?5.8g；SDS 0.37g；甲醇200ml；加ddH2O定容至
蛋白質印跡法的操作步驟
試劑準備1、SDS-PAGE試劑：見電泳實驗。2、勻漿緩沖液：1.0M Tris-HCl(pH 6.8)1.0ml；10%SDS 6.0ml；β-巰基乙醇 0.2ml；ddH2O 2.8ml。3、轉膜緩沖液：甘氨酸 2.9g；Tris 5.8g；SDS 0.37g；甲醇200ml；加ddH2O定容至
蛋白質印跡法實驗的要點
蛋白質印跡法是分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中常用的一種實驗方法。在實驗過程中有很多要點需要實驗人員注意，小析姐整理了一些，希望對你的實驗能有所幫助。 蛋白質印跡法(免疫印跡試驗)即Western Blot，其基本原理是通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細胞或生物組織樣品進行著色。通過分析著色的
蛋白質印跡法的應用特點
蛋白質印跡法是由瑞士米歇爾弗雷德里希生物研究所（Friedrich Miescher Institute）的Harry Towbin在1979年提出的。在尼爾·伯奈特（Neal Burnette）于1981年所著的《分析生物化學》（Analytical Biochemistry）中首次被稱為West
蛋白質印跡法的操作步驟
試劑準備1、SDS-PAGE試劑：見電泳實驗。2、勻漿緩沖液：1.0M Tris-HCl(pH 6.8)1.0ml；10%SDS 6.0ml；β-巰基乙醇 0.2ml；ddH2O 2.8ml。3、轉膜緩沖液：甘氨酸 2.9g；Tris 5.8g；SDS 0.37g；甲醇200ml；加ddH2O定容至