目的基因的Ct值小于內參基因,這個內參基因還能用嗎
如何通過熒光定量目的基因和GAPDH計算相對表達量內參就是一個表達量在各個組基本保持不變的基因,又叫看家基因,比如常用的GAPDH, actin。或者18s rRNA也可以。如果內參表達量一致,說明你PCR的上樣量一致,樣本的質量也一致。如果出入很大,說明你的樣本的濃度或者是質量有問題。測到的目的基因的表達量就不可靠了管家基因是用來定量的。用來計算相對表達量。管家基因在相同量樣品中的表達量我們認為是一致的。然后根據這個量來計算你的基因在不同樣品中的表達量。所以每一個都需要單獨的樣品。基因組干擾需要你在提取RNA以后用DNase處理樣品。如果不放心,可以拿處理過的RNA做膜版,跑一次,如果有帶就是有污染,如果沒有可以合成cDNA庫了。......閱讀全文
PCR的Ct值
Ct值:C代表Cycle,t代表threshold,Ct值的含義是:每個反應管內的熒光信號到達設定的域值時所經歷的循環數PCR反應的前15個循環的熒光信號作為熒光本底信號,熒光域值的缺省設置是3-15個循環的熒光信號的標準偏差的10倍
PCR的Ct值
Ct值:C代表Cycle,t代表threshold,Ct值的含義是:每個反應管內的熒光信號到達設定的域值時所經歷的循環數PCR反應的前15個循環的熒光信號作為熒光本底信號,熒光域值的缺省設置是3-15個循環的熒光信號的標準偏差的10倍
CT值的關系
研究表明,每個模板的Ct值與該模板的起始拷貝數的對數存在線性關系,起始拷貝數越多,Ct值越小。利用已知起始拷貝數的標準品可作出標準曲線,其中橫坐標代表起始拷貝數的對數,縱坐標代表Ct值。因此,只要獲得未知樣品的Ct值,即可從標準曲線上計算出該樣品的起始拷貝數。
PCR的Ct值
Ct值:C代表Cycle,t代表threshold,Ct值的含義是:每個反應管內的熒光信號到達設定的域值時所經歷的循環數PCR反應的前15個循環的熒光信號作為熒光本底信號,熒光域值的缺省設置是3-15個循環的熒光信號的標準偏差的10倍
Ct-值出現過晚(Ct>38)-問題分析
擴增效率低:反應條件不夠優化。設計更好的引物或探針;改用三步法進行反應;適當降低退火溫度;增加鎂離子濃度等。 PCR 各種反應成分的降解或加樣量的不足。 PCR 產物太長: 一般采用 80~150 bp 的產物長度。
CT值是何意思
ct值是表示身體組織密度的。做ct是為了準確判斷可以測ct值。ct值越大表示密度越大。其中以水得ct值為0.密度大于水ct值為正,密度小于水ct值為負。空氣的密度最小ct值為-2000,骨質密度最大ct值為2000
CT值是何意思
ct值是表示身體組織密度的。做ct是為了準確判斷可以測ct值。ct值越大表示密度越大。其中以水得ct值為0.密度大于水ct值為正,密度小于水ct值為負。空氣的密度最小ct值為-2000,骨質密度最大ct值為2000
淺談肝癌的ct值
核心提示: 肝癌是發生在肝臟的惡性腫瘤,它會破壞肝臟的功能,所造成的癥狀折磨性是很強烈的。由于此病的發生跟病毒感染,飲食,環境等因素有關,需要人們做好相對應的護理,減少發生肝癌的幾率。患病后要及時的去進行檢查,做好充分的檢查措施是很重要的,例如進行肝癌CT檢查。 肝癌在
CT值是何意思
ct值是表示身體組織密度的。做ct是為了準確判斷可以測ct值。ct值越大表示密度越大。其中以水得ct值為0.密度大于水ct值為正,密度小于水ct值為負。空氣的密度最小ct值為-2000,骨質密度最大ct值為2000
ct值是什么意思
ct值是表示身體組織密度的。做ct是為了準確判斷可以測ct值。ct值越大表示密度越大。其中以水得ct值為0.密度大于水ct值為正,密度小于水ct值為負。空氣的密度最小ct值為-2000,骨質密度最大ct值為2000
ct值是什么意思
ct值是表示身體組織密度的。做ct是為了準確判斷可以測ct值。ct值越大表示密度越大。其中以水得ct值為0.密度大于水ct值為正,密度小于水ct值為負。空氣的密度最小ct值為-2000,骨質密度最大ct值為2000
ct值是什么意思
ct值是表示身體組織密度的。做ct是為了準確判斷可以測ct值。ct值越大表示密度越大。其中以水得ct值為0.密度大于水ct值為正,密度小于水ct值為負。空氣的密度最小ct值為-2000,骨質密度最大ct值為2000
無-Ct-值出現問題
檢測熒光信號的步驟有誤:一般 SG 法采用 72℃ 延伸時采集,Taqman 法則一般在退火結束時或延伸結束采集信號。 引物或探針降解:可通過 PAGE?電泳檢測其完整性。 模板量不足:對未知濃度的樣品應從系列稀釋樣本的最高濃度做起。 模板降解:避免樣品制備中雜質的引入及反復凍融的情況。??
ct值是什么意思
ct值是表示身體組織密度的。做ct是為了準確判斷可以測ct值。ct值越大表示密度越大。其中以水得ct值為0.密度大于水ct值為正,密度小于水ct值為負。空氣的密度最小ct值為-2000,骨質密度最大ct值為2000
肝/脾CT值的介紹
肝/脾CT值指的是肝臟密度除以脾臟密度。它是依靠現代醫學手段,通過進行“上腹部常規CT平掃”的體檢方式,從中得出一項的重要數據,該數據可以判斷脂肪肝的輕重程度以及后期進行治療時的變化,是目前最為準確檢測脂肪肝的科學方法。 目前脂肪肝的檢測手段眾多,但專家指出,能夠準確判斷脂肪肝程度及逆轉變化的
ct值是什么意思
ct值是表示身體組織密度的。做ct是為了準確判斷可以測ct值。ct值越大表示密度越大。其中以水得ct值為0.密度大于水ct值為正,密度小于水ct值為負。空氣的密度最小ct值為-2000,骨質密度最大ct值為2000
熒光定量PCR的CT值
如果有標準曲線,按照標準曲線計算。一般都是相對量。則用delta delta CT方法來計算。舉例如下:對照組基因A的CT值為20, 內參(比如βactin)CT值15。實驗組基因A CT值18,內參CT值14。首先算加樣量:delta CT=15-14=1。2的1次方是2。也就是說實驗組的加樣量是
PCR實驗中Ct值出現過晚(Ct>38)的原因
(1)擴增效率低: 優化反應條件;設計更好的引物或探針;改用三步法進行反應等。(2)模版降解或模版濃度太高。(3)試劑靈敏度不好:更換更高靈敏度、抗干擾的試劑。(4)檢測基因結構復雜:高GC、復雜二級結構和長片段模版,都會影響PCR擴增。(5)擴增產物太長: 一般采用80-150bp的產物長度。
定量pcr中CT值的定義
Ct值:C代表Cycle,t代表threshold,Ct值的含義是:每個反應管內的熒光信號到達設定的域值時所經歷的循環數PCR反應的前15個循環的熒光信號作為熒光本底信號,熒光域值的缺省設置是3-15個循環的熒光信號的標準偏差的10倍
熒光PCR時ct值大于30
看了你空間里的溶解曲線,你可以看到溶解峰的溫度都很低,全在80以下,你擴出來的東西多半只是引物,你跑定量的時候有做NTC的孔嗎,如果有做,可以對照NTC組和加了模板的組,溶解峰還是一樣的話,那你擴出來的產物100%是引物了。再有,你的擴增曲線問題,CT太了,一般做定量認為CT=25時,是一個模板擴出
PCR擴增中CT值的意義
在PCR擴增反應的最初數個循環里,熒光信號變化不大,接近一條直線,這樣的直線即是基線,這條線是可以自動生成也可以手動設置的。之后反應會進入指數增長期,這個期間擴增曲線具有高度重復性,在該期間,可設定一條熒光閾值線,它可以設定在熒光信號指數擴增階段任意位置上,但一般會將熒光閾值的缺省設置是 3-15
定量PCR-ct值在多少范圍適合
通常情況下,我們認定為15到35CT比較合理,超過35個CT那么就算它沒有擴增了,如果15之前起峰,那么就是模板濃度太高所引起的,如果發文章,那么建議你控制在15到35之間吧
關于熒光定量PCR的CT值問題
如果有標準曲線,按照標準曲線計算。一般都是相對量。則用delta delta CT方法來計算。舉例如下:對照組基因A的CT值為20, 內參(比如βactin)CT值15。實驗組基因A CT值18,內參CT值14。首先算加樣量:delta CT=15-14=1。2的1次方是2。也就是說實驗組的加樣量是
qPCR實驗的Ct值的合理范圍
理性闡述 qPCR 實驗的 Ct?值的合理范圍。(附 Ct 值過大或過小的解決方法)Ct 值是什么?Ct 值具有什么樣的作用?Ct 值的正常范圍是多少?Ct 值太大或者太小的原因?Ct值是熒光定量PCR最重要的結果呈現形式。它被用于計算基因表達量差異或者基因拷貝數。那么熒光定量的Ct值多大可被認為是
降鈣素(CT)測定的參考值是什么
化學發光法:男:< 8.40ng/L; 女:< 5.00ng/L
溶解曲線有雙峰則ct值是否可信
如果有標準曲線,按照標準曲線計算。 一般都是相對量。則用delta delta CT方法來計算。舉例如下: 對照組基因A的CT值為20, 內參(比如βactin)CT值15。實驗組基因A CT值18,內參CT值14。 首先算加樣量:delta CT=15-14=1。2的1次方是2。也就是說。
realtime-PCR中內參基因的CT值
這個要看你在做PCR前的加樣量是否一致。如果加樣量是一致的,而內參做出來差別大(比如3-4個CT值)那說明你的實驗體系有嚴重的問題。理論上加入的DNA量一樣多,內參的CT值應該都一樣。如果你能肯定加樣量是一致的,那說明你的樣本要么降解了,要么就是你的實驗處理對內參的量產生了影響,必須換一個基因做內參
realtime-PCR中內參基因的CT值
這個要看你在做PCR前的加樣量是否一致。如果加樣量是一致的,而內參做出來差別大(比如3-4個CT值)那說明你的實驗體系有嚴重的問題。理論上加入的DNA量一樣多,內參的CT值應該都一樣。如果你能肯定加樣量是一致的,那說明你的樣本要么降解了,要么就是你的實驗處理對內參的量產生了影響,必須換一個基因做內參
realtime-PCR中內參基因的CT值
這個要看你在做PCR前的加樣量是否一致。如果加樣量是一致的,而內參做出來差別大(比如3-4個CT值)那說明你的實驗體系有嚴重的問題。理論上加入的DNA量一樣多,內參的CT值應該都一樣。如果你能肯定加樣量是一致的,那說明你的樣本要么降解了,要么就是你的實驗處理對內參的量產生了影響,必須換一個基因做內參
realtime-PCR中內參基因的CT值
這個要看你在做PCR前的加樣量是否一致。如果加樣量是一致的,而內參做出來差別大(比如3-4個CT值)那說明你的實驗體系有嚴重的問題。理論上加入的DNA量一樣多,內參的CT值應該都一樣。如果你能肯定加樣量是一致的,那說明你的樣本要么降解了,要么就是你的實驗處理對內參的量產生了影響,必須換一個基因做內參