BHT測定抗氧化劑

為了提高油脂的穩定性，防止酸敗，延長保質期,近幾年來國內已開始在食用油中添加抗氧化劑，由于抗氧化劑BH、PG對熱穩定性較差，而BHT的熱穩定性較好，能適應精練油的全過程，所以在食用油中添加抗氧化劑BHT。

1.比色法原理

油脂中的抗氧化劑BHT經水蒸氣蒸餾法將BHT從油脂中分離出來，其蒸餾液將BHT從油脂中分離出來，其餾出物經冷凝后溶于甲醇中，遇鄰聯二茴香胺，亞硝酸鈉試劑，生成橙紅色物質，用氯仿萃取后的深紅色溶液在520nm處比色測E。

3.     標準曲線的繪制

取6個用黑布扎的60ml分液漏斗,分別吸BHT標準溶液5μg/ml 于60ml分液漏斗中→加50%甲醇溶液至25ml→ 加鄰聯二茴香胺溶液5ml→搖勻→加0。3%亞硝酸鈉2ml→搖1分鐘→放置10分鐘→加氯仿10ml→搖1分鐘→分層后→將下層氯仿放入黑紙包扎的10ml比色管→520nm測E→繪制標準曲線                              

3.樣品處理

將油脂樣5g→于500ml蒸餾瓶→加無水CaCL₂ 16克→水10ml→當溫度達到165℃→連接好水蒸氣裝置→用50ml甲醇的容量瓶接收（最好是200ml）→收集餾液為100ml(共計150 ml)→用熱甲醇（40-50℃）分次洗滌冷凝管→合并于容量瓶→用甲醇定容200ml

4.  測定

吸餾液25ml→于黑布包扎的60ml分液漏斗→加鄰聯二茴香胺溶液5ml→搖勻→加0.3%亞硝酸鈉

2ml→搖勻1分鐘→放10分鐘→加10ml氯仿→振搖1分鐘→分層后→將氯仿液放入黑紙包扎的10ml

比色管→520nm下測E

5.  計算

BHT(mg/kg)=V/W*C/V₁  

W----樣品重量(g) 

V----樣品定容體積(ml)  

V₁------測定時所用的提取液體積（ml）

C-------相當于標準濃度(μg)

6.     注意事項：

(1)  控制蒸氣后不要太高，以免油滴帶出，影響測定結果

（2）蒸餾結束后，用熱的甲醇淋洗彎管以及冷凝管必須少量多次，以免沖洗不干凈，影響結果偏低。

（3）加入顯色劑后的反應時間以5—7分鐘顯色到達最高峰10分鐘之內保持恒定，然后逐漸褪色，所以必須靜置10分鐘，然后立即加氯仿萃取。

（4）氯仿萃取后，放于暗處1小時，如果暴露于光線中會很快褪色。

（5）所生成的有色物，對光具有敏感性，在暗處內操作最好