實驗材料 酵母菌
試劑、試劑盒 酵母裂解酶山梨糖
儀器、耗材 解剖顯微鏡解剖針
實驗步驟
1a.
Glusulase酶處理：用無菌水洗滌孢子3次，再用5 ml 無菌水重懸并取30 μl 稀釋在270 μl
無菌水中。在光學顯徽鏡下觀察細胞，檢測完整的子囊，加3 μl 稀釋的Glusulase酶到孢子制備液中，用旋渦混合器輕輕振蕩混勻，室溫溫育2
min，然后在顯微鏡下觀察細胞，繼續于室溫溫育，直到Glusulase酶處理完全。
1b. 酵母裝解酶-100T處理：細胞用50 μl 酵母裂解酶-100T溶液重懸。在光學顯微鏡 下觀察完整的子囊。30℃溫育10 min，沿試管壁緩緩地加入0.8 ml 無菌水。
2. 將消化管置于冰浴中，用接種環蘸取處理過的孢子在YPD剖分平板表面劃兩條平行線。
3. 在解剖顯微鏡下觀察倒置平板，可觀察到單個四分體，排列成四面體或鉆石形的成簇孢子。
4. 固定平板，使平板上的劃線與平臺的x軸平行，選擇一個獨立的四分體，聚焦并定位在視野中心。使用粗調旋鈕向上調整解剖針的位置，當操縱桿推至約一半時，針頭接觸到平板的表面。
5. 輕輕將針頭接觸到平板表面，緊挨并挑起四分體。
6. 移動平板，將針定位在離劃線處1 cm 的位置并垂直于四分體孢子的劃線，輕輕地將針頭接觸到瓊脂的表面并置四分體于平板上，在操作過程中可能發生以下情況：
（1）沒有放下孢子，出現這種請況需要重復步驟6，當針頭接觸瓊脂時，用力稍大一點。
（2）平板上只有1個孢子，沿x軸移動約0.5 cm 重復步驟6。
（3）如果有2或3個孢子在平板上，那么沿y軸移動約1 cm，重復步驟6，放置1個或更多個孢子。旋動操縱桿將孢子分開，以便針尖沖擊平板并帶出孢子，挑出并重新安置孢子，以使孢子的位置與原劃線垂直并各自相隔0.5 cm。
（4）如果出現4個孢子，應用針尖將它們分開。一旦完成以上工作，挑一個或更多的孢子，將它們點在原劃線垂直的位置并各自相隔0.5 cm。
7. 用x軸和y軸的控制旋鈕將平板移回使解剖針可直接在經過處理孢子的劃線的正下方，重復步驟5和6，將毎個四分體孢子按一定間隔點在同一條直線上，位于原四分體所在直線的1 cm 處，并與之平行。
8. 這些直線的位置可以這樣決定：在可動平臺上隨意劃一標記線，然后與跟平臺后緣相平的一個固定的x軸標尺對齊。另一種方法則是用一張每隔0.5 cm 作上標記的紙條沿平臺的前緣貼上，此時用平板固定器的右下角作為隨意決定的對齊點。
9. 繼續重復步驟5~8，直到沿x軸的所有位置均點滿剖分四分體，將平板轉動180。， 從平皿另一側對應的劃線上剖分其他四分體。平板的每一側可剖分13個四分體。