實驗材料 昆蟲細胞
試劑、試劑盒 胎牛血清脂質體轉染劑
儀器、耗材 培養皿錐形瓶培養箱離心機轉子
實驗步驟
1. 接種2×106個Sf9細胞于60 mm 培養皿，在含10%胎牛血清的完全培養液或無血清培養液中培養，于27℃培養30~60 min，讓細胞貼壁。
2. 相應于毎一待轉染的培養皿，吸取40 μl 無菌水，加入一支無菌聚苯乙烯管中，加入5 μl 線性化的AcMNPV DNA和5 μl 100 ng/μl 的質粒DNA。將Lipofectin 充分混勻后，往DNA溶液中加入50 μl，輕柔混勻，于室溫溫育15 min。
3. 在15 min 的溫育期間，用1.5 ml 不含胎牛血清的完全培養液代替培養皿中的培奍液。
4. 往培養皿中遂滴加入Lipofectin-DNA復合物，同時輕柔旋轉平皿加以混勻。于27℃溫育4~5 h。
5. 往每個培養皿中加入1.5 ml 含10%胎牛血清的完全培養液（或含有5%胎牛血清的無血清培養液），在27℃加濕培養箱中溫育60~72 h。
6. 從每個堉養皿中將轉染上清（由培養液和病毒組成）轉移至無菌的15 ml 錐形離心管中4℃ 1 000 g 離心10 min。將病毒上清轉移至新的滅菌試管，4℃避光保存備用。