創業初期NGS的自動化文庫構建平臺的選擇

　　09年和夫人討論了之后，毅然辭掉了薪水穩定的工作，開始了自己的創業生涯，當時磕磕碰碰不多表。

　　13年下半年公司面臨轉型，技術服務是非常重要的藍海，而NGS相關工作是我們預估的市場之最，所以整體公司也朝這個方向去運作了。？

　　不過對于任何商業主體初創期最痛苦的就是怎么用錢，尤其是花在設備購買上。儀器供應商大家都知道就那么幾家，可是發現在選擇批量處理的自動化文庫構建和核酸提取平臺上，哪怕是網絡上都沒給足夠多的建議，這里寫下這篇文章，也是為同仁將來的工作節約一些時間。？

　　首先是要解決的是思維，自動化文庫構建是NGS流程中最為關鍵的一步。因為NGS工作是一件非常辛苦的事，工作人員常常要站著工作一天。不管是文庫構建還是濃度均一化，一天的實驗還行，但是如果你的Case多起來，超強度的工作是無法負荷的，所以用上全自動文庫構建的平臺是非常重要的，畢竟由于工傷造成的生產效率下降是非常憋屈的。？

　　那么下面來說就是要購買什么品牌的移液工作站進行自動化文庫構建和核酸提取了，我個人覺得工作站還是要選大品牌的，如Hamilton，Eppendorf，Tecan，Beckman這些大品牌的。不是說有偏見，但是俗話說的好，一分錢一分貨，我們試用過的一些非主流品牌的工作站看起來很美，功能各種全，參數各種好，價格非常低。但是在設計里面有很多天生的問題，故障率各種高，機器缺少自我保護機制，稍不留神，就出個要大修的故障，放在學校實驗室還成，但是公司受不了，每一分損失的時間，那就是金錢，呵呵。

　　接下來的邏輯就是要說下主流品牌工作站。各個廠家的工作站在設計理念上相差的還是比較大的，這個我想應該是和當初設計這些工作站用來滿足不同的實驗需求是有很密切的關系吧。比如在我用過的工作站里面，移液方式就有兩大類，一類是空氣活塞的，比如Eppendorf和Hamilton的，這個移液原理和實驗室用的移液器是一樣的；另外一類是液路式的，比如Tecan、Beckman和PE的部分機器，用個長長的管路通過里面的液壓來控制吸放液。個人的感受是液路式的好處在于可以通過吸頭液來清洗吸頭，這種設計在做ELISA的時候是比較有用的。但是一般做分子實驗，肯定會換吸頭啊，不然交叉污染傷不起啊傷不起，而且那個管路的液體要定期維護，也是個大問題。所以選擇氣體活塞這種形式的，對咱們做分子實驗，特別是NGS這類實驗的就比使用液路式的要合適，畢竟做分子實驗都是用慣移液器的嘛。還有呢，關于分液頭間距可調這一點，可謂仁者見仁，智者見智了，對于商業來說意義不是特別大。Hamilton和Tecan的機器都有可調間距的。但是這個功能在設定實驗程序的時候就相對比較復雜，而且由于間距可調的緣故，各個分液頭都是獨立控制的。分液頭之間的重復性會有點問題，需要工程師逐個調試。上回看廠家工程師來調試，可真是件辛苦的事情。

　　說到自動化工作站，就不得不說下各個廠家都會提到的一個無法正常理解的功能——液面探測功能，這個功能也是自動化工作站所謂高大上的地方。據我了解，自動化工作站目前有的液面探測功能主要有接觸式和非接觸式兩大類。接觸式的又有采用導電吸頭的電容式和采用壓力傳感的壓力式，非接觸式的有超聲波探測和紅外探測兩大類。雖然各個廠家銷售都說自己的比別人的準，但是我們實驗室實際測試下來都沒太大的區別。那么來講講這兩種探測方式最大的區別就是，接觸式的是實時探測的，非接觸式的是在實驗開始前探測的。實時探測看起來確實很酷！但是，我們在做實驗的時候經常出現這樣的情況：接觸式探測的功能，并不能在實驗開始的時候知道有多少液體，而是等發現液體不夠了再通知我們往里面加試劑。那么問題就來了，如果我們按排班標準安排好生產工作，由于這個異想天開的功能，在機器運轉的時候工作人員去忙別的了，可是，等差不多時間再去實驗室看看運行的怎么樣了，結果發現機器在半途停著，等我們加試劑呢，這種效率損失實在郁悶。相比之下非接觸探測的一般是在實驗開始的時候就探測了，如果試劑不夠，在運行之前就提示我們去加夠試劑，這樣至少可以安心地去吃飯。這里順便吐槽下Beckman的機器，他們的探測器是裝在分液頭上的，而且只有單道的機器才配備，給我們的那個機器卻是8道的，說好的液面探測功能就這樣沒有了，感覺被坑了。？

　　最后說到工作站，其實最重要的還是精度問題，畢竟做文庫還是有很多小體積要加的，比如加個酶啊，加個barcode啊等等，這里就不得不贊下Eppendorf機器的移液精度了。雖然幾個廠家給我們的宣傳冊上寫的精度都差不多的，但是我們測試下來的機器移液精度，Eppendorf遠遠高于其他幾家，這點對于質量控制來說非常重要。多啰嗦幾句，如果在選工作站的時候還是要根據自己的實驗要求來選，而且功能上也要溝通好，現在做NGS一般比較煩的步驟有核酸提取、文庫構建和濃度均一化。有些工作站是這些功能都有的，但是會貴點。有些工作站只有部分功能，在選擇的時候一定要先搞清楚，千萬別只問銷售，銷售肯定和你說都可以的，要找技術確認。

　　希望這點文字能夠給要選用自動化文庫構建平臺的商業同伴們一點微薄的幫助，也愿大家早日能夠在行業找到自己的著力點，實現人生目標。