怎樣選擇液相色譜柱？

現代高效液相色譜中，分離效果好壞很大程度上取決于色譜填料的選擇。但是色譜填料的選擇范圍很寬，要做合適的選擇，必須對此有一定的認識和了解。

1.正相色譜
正相色譜用的固定相通常為硅膠（Silica）以及其它具有極性官能團，如，胺基團（NH₂，APS）和氰基團（CN，CPS）的鍵合相填料。
由于，硅膠表面的硅羥基（SiOH）或其它極性基團極性較強；因此，分離的次序是依據樣品中各組份的極性大小，即極性較弱的組份最先被沖洗出色譜柱。
正相色譜使用的流動相極性相對比固定相低，如，正己烷（Hexane）、氯仿（Chloroform）、二氯甲烷（Methylene Chloride）等。。。

2.反相色譜
反相色譜用的填料常是以硅膠為基質，表面鍵合有極性相對較弱的官能團的鍵合相。反相色譜所使用的流動相極性較強，通常為水、緩沖液與甲醇、乙腈等的混合物。
樣品流出色譜柱的順序是極性較強的組份最先被沖洗出，而極性弱的組份會在色譜柱上有更強的保留。
常用的反相填料有：

C₁₈(ODS)、C₈(MOS)、C₄(Butyl)、C₆H₅(Phenyl)等。。。

聚合物填料多為聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸酯等，其主要優點是在pH值為1～14均可使用。相對于硅膠基質的C18填料，這類填料具有更強的疏水性；大孔的聚合物填料對蛋白質等樣品的分離非常有效。現有的聚合物填料的缺點是相對硅膠基質填料，色譜柱柱效較低。

其它HPLC的無機填料色譜柱也已經商品化。由于其特殊的性質，一般僅限于特殊的用途。如，石墨化碳正逐漸成為反相色譜柱填料。這種填料的分離不同于硅膠基質烷基鍵合相，石墨化碳的表面即是保留的基礎，不再需其它的表面改性。該柱填料一般比烷基鍵合硅膠或多孔聚合物填料的保留能力更強。石墨化碳可用于分離某些幾何異構體，又由于在HPLC流動相中不會被溶解, 這類柱可在任何pH與溫度下使用。氧化鋁也可用于HPLC，氧化鋁微粒剛性強，可制成穩定的色譜柱柱床，其優點是可在pH高達12的流動相中使用，但是，由于氧化鋁與堿性化合物作用也很強，應用范圍受到一定的限制，所以未能廣泛應用。新型氧化鋯基質色譜填料也可用于HPLC，商品化的僅有聚合物涂層的多孔氧化鋯微球色譜柱，應用pH范圍1～14，溫度可達100℃。由于氧化鋯填料是最近幾年才開始研究，加之面臨的實驗難度，其重要用途與優勢尚在進行中。