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  • 發布時間:2018-11-10 00:46 原文鏈接: 培養基為您介紹如何利用PEG介導動物細胞融合

      細胞融合或細胞雜交是指真核細胞通過介導和培養基,兩個或多個細胞合并成一個雙核或多核細胞的過程。人工的細胞融合開始于20世紀50年代, 60年代到70代作為一門新興的技術, 發展非常快, 應用范圍也極為廣泛, 除了同種類細胞間可以融合, 種間遠緣細胞也能融合, 細胞與組織不同, 不排斥異類、異種細胞, 動物細胞如此,植物細胞也是如此。基因型相同的細胞融合成的雜交細胞稱為同核體;來自不同基因型的雜交細胞則稱為異核體。

      利用PEG介導的動物細胞培養基融合,其實驗原理到目前為止還沒有完全定論。學者們一般認為,PEG改變各類細胞的膜結構,使兩細胞相互接觸部位的膜脂雙層中磷脂分子發生疏散、進而使其結構發生重排,再加上膜脂雙層的相互親合以及彼此間表面張力的作用,引起相臨的重排質膜在修復時相互合并在一起, 使兩細胞的胞質溝通, 從而造成相互接觸的細胞之間發生融合。

      利用PEG介導細胞培養基融合, 其融合效果受以下幾種因素的影響。1. PEG的分子量與濃度: 細胞融合效果與PEG的分子量及其濃度成正比;但PEG的分子量越大、濃度越高, 對細胞的毒性也就越大。為了兼顧二者,在實驗時常常采用的PEG分子量一般為1000~4000,濃度一般為40~60%。2. PEG的pH值: 經驗證,PEG的pH值在8.0~8.2之間融合效果zui好。3. PEG的處理時間: 處理時間越長,融合效果越好, 但對細胞的毒害也就越大。故一般將處理時間限制在1分鐘之內。本實驗中細胞培養基融合后無需繼續培養, 故處理時間可適當放寬至數分鐘。4. 融合時的溫度: 由于生物膜膜的流動性與溫度成正比,故細胞的融合效果也與溫度成正比。因此,為了獲得更好的融合效果, 在細胞可能承受的溫度范圍內可適當提高處理的溫度。對于哺乳動物的細, 一般采用的溫度為38~40℃。

    用于脆弱擬桿菌群的分離培養 BBE Agar 類桿菌-膽汁-七葉甙(BBE)瓊脂 250
    用于軍團菌的選擇性分離培養(OXOID方法) BCYE Agar(Legionella Agar) BCYE 瓊脂(Legionella 瓊脂) 250
    發酵蛋白胨                            250
    用于念球菌的分離培養和計數培養基(OXOID方法) BIGGY Agar(Nickerson Medium) BIGGY 瓊脂 250
    用于尿液中微生物的選擇性分離培養(OXOID方法) C.L.E.D Medium C.L.E.D 培養基 250
    每支加入100ml C.L.E.D 培養基中 C.L.E.D Medium Supplement C.L.E.D 培養基添加劑 1ml*5支
    用于淋球菌的分離培養(OXOID方法) GC Agar GC瓊脂 250
    用于雙歧桿菌的分離培養 BLB Medium BLB培養基 250
    用于從含革蘭氏陰性菌的標本中分離培養革蘭氏陽性菌 PEA Agar PEA 瓊脂 250g
    用于生產過程中無菌監測(Acumedia方法) Eugonic Agar 艾格瓊脂 250
    用于淋球菌的分離培養(Quelab方法) NTM Medium NTM 培養基 250
    用于淋球菌的分離培養(Quelab方法) Thayer Martin Agar TM培養基 250
    用于基因工程中酵母菌的發酵培養 YNB Medium YNB 培養基 100
    培養基原材料,提供細菌生長氮源,含色氨酸 Tryptone 胰蛋白胨     250
    干酪素胰酶水解而成,培養基原材料 Peptone from Casein 酪蛋白胨     250
    培養基原材料,提供細菌生長所需的生長因子 Beef Extract Powder 牛肉浸粉    250
    培養基原材料,提供細菌生長所需的維生素B族 Yeast Extract Powder 酵母浸粉    250
    培養基原材料,培養基凝固劑 Agar Bacteriological 細菌瓊脂粉    250
    培養基原材料,含碳水化合物,提供細菌生長氮源 Peptone from Soybean Meal  植物(大豆)蛋白胨    200


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