技術講解：細胞融合的方法及誘導物

同種細胞在培養時2個靠在一起的細胞自發合并，稱自發融合;異種間的細胞必須經誘導劑處理才能融合，稱誘發融合。

仙臺病毒法融合

①兩種細胞在一起培養，加入病毒，在4℃條件下病毒附著在細胞

膜上。并使兩細胞相互凝聚;

②在37℃中，病毒與細胞膜發生反應，細胞膜受到破環，此時需

要Ca2+和Mg2+，zui適PH為8.0一8.2;

②細胞膜連接部穿通，周邊連接部修復，此時需Ca2+和ATP;

④融合成巨大細胞，仍需ATP 。

聚乙二醇（PEG）法

聚乙二醇（PEG）結構為：HOH2C（CH20CH2）nCH2OH，分子量大于200小于6000者均可用作細胞融合劑。PEG經高壓滅菌后，與溫熱的Engle氏液混合。通常用分子量低于1000的PEG作融合劑zui好，50%PEG溶液能產生zui多雜交細胞。PEG溶液在pH6.0時細胞融合率zui高。

電融合法

在直流電脈沖的誘導下，細胞膜表面的氧化還原電位發生改變，使異種細胞粘合并發生質膜瞬間破裂，進而質膜開始連接，直到閉和成完整的膜，形成融合體。

優點：融合率高、重復性強、對細胞傷害小;

裝置精巧、方法簡單、可在顯微鏡下觀察或錄像觀察融合過程;

免去PEG誘導后的洗滌過程、誘導過程可控性強。

融合誘導物

細胞融合的誘導物種類很多.常用的主要有生物法用滅活的仙臺病毒（Sendai virus），化學法如用聚乙二醇（Polyethyleneglycol，PEG）和物理法如電脈沖。目前應用zui廣泛的是聚乙二醇，因為它易得、簡便，且融合效果穩定。PEG的促融機制尚不完全清楚，它可能引起細胞膜中磷脂的酰鍵及極性基團發生結構重排。動植物細胞融合方法不同，生物法利用滅活仙臺病毒是動物細胞融合所特有的。

自發條件下或人工誘導下, 兩個不同基因型的細胞或原生質體融合形成一個雜種細胞。基本過程包括細胞融合導致異核體（heterokaryon）的形成, 異核體通過細胞有絲分裂導致核的融合, 形成單核的雜種細胞。有性生殖時發生正常的細胞融合, 即由兩個配子融合成一個合子。

細胞融合不僅可用于基礎研究，而且還有重要的應用價值，在植物育種方面已經成功的有蘿卜+甘藍、粉藍煙草+郎氏煙草、番茄+馬鈴薯等等。細胞融合另一個重要應用就是制備單克隆抗體，單克隆抗體可以用作診斷試劑，治療疾病和運載藥物，具有準確，高效，簡易，快速等優點。