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  • 發布時間:2018-11-21 13:49 原文鏈接: AP/MALDI質譜成像Q&A

    AP/MALDI 不涉及真空操作,性能及成像媲美真空 MALDI,為最具性價比的質譜成像系統。


    1. 何為“質譜成像”或“成像質譜”?

    成像質譜(IMS)為非常靈敏的分子成像技術,提供分子及其空間分辨信息。分析對象可以是組織切片、物質表面、單細胞等,能同時在一次實驗中可視化數千個不同分子的分布信息。為多分子同時成像技術。適于內源性化合物如脂質、肽和蛋白質,及外源性化合物如聚合物、藥物的分布研究,提供從細胞到有機體的詳細的生物過程分子信息。


    2. 質譜成像和其他醫學成像技術有何不同?

    質譜成像 (MSI) 主要是用來研究病理學離體組織,與磁共振成像 (MRI) 或正電子發射斷層攝影 (PET) 掃描技術實現體內診斷、及免疫組化 (IHC) 等,不同;MSI 常作為體內成像的優勢補充技術,對生物分子的分布代謝加以確認,無需標記實現分子可視化。MSI 有時作為唯一成像工具研究其他技術無法實現的成像、分子修飾、及信息集合。


    3. 何為 MALDI ?

    MALDI(基質輔助激光解吸電離,Matrix Assisted Laser Desorption Ionization),所產生的質譜圖多為單電荷離子,因而質譜圖中的離子與多肽和蛋白質的質量有一 一對應關系。MALDI 產生的離子常用飛行時間質量分離器 (TOF)來檢測質量數,因此合稱 MALDI-TOF。 

    MALDI 的優點在于,通過基質輔助,使一些難于電離的樣品電離且無明顯的碎裂,得到完整的被分析物分子的電離產物,特別是生物大分子。準分子離子峰很強,幾乎沒有碎片離子,可以直接分析蛋白質酶解后多肽混合物,對樣品中雜質的耐受量較大,適用于多肽、蛋白質、糖蛋白、DNA 片段、多糖及其他生物技術產品的分析。

    傳統的真空紫外激光 MALDI 源處于真空環境中,分析物的離子化發生在高真空條件下。


    4. 何為 AP/MALDI ?

    AP/MALDI (大氣壓基質輔助激光解吸電離源)采用高效的固態 Nd:YAG 高頻(達1萬赫茲)激光器,離子化發生在大氣壓環境,離子流更加連續穩定,調諧優化簡便。可質譜成像,成像分辨率達 5 μm 以下。

    AP/MALDI 作為一種外接離子源,可方便地與各類型的質譜儀聯用,保留質譜原有的高分辨率、高靈敏度等功能。適于多肽、蛋白質、核酸、唾液酸神經節苷酯、低聚木糖、表面活性劑、聚合物等大分子以及脂質、氨基酸、寡肽、中性寡糖、植物皂苷等小分子化合物的原位、直接分析。


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    AP/MALDI 原理圖


    5. AP/MALDI 與 真空 MALDI 的區別?

    相似之處:

    1)工作原理類似,都是以低熔點的小分子有機物做基質,吸收激光能量,在其脫附成氣態進入氣相的過程中發生電離,生成基質離子,中性待測物與基質離子發生氣相中的質子交換或電子遷移并離子化,進入質譜而被檢測。

    2)真空 MALDI 對樣品和基質的處理方法也同樣適用于 AP/MALDI。

    3)目前的分辨率,最高型號都已達10 μm 以下空間分辨,新一代 AP/MALDI 更達到 5 μm微米以下。


    不同之處:

    1)AP/MALDI 的靶板處于常壓,不涉及真空操作,與 ESI 電噴霧源輕松切換;

    2)AP/MALDI 為外置式電離源,與質譜本身無關聯,可保留質譜如 Orbi、FTMS、QQQ 等原有的高分辨率、高靈敏度等性能;

    3)AP/MALDI 的離子化發生在常壓下,電離更柔和,產生碎片更少,且能夠提供穩定離子流,為準連續電離源,更適合于易碎分子離子的研究;

    4)AP/MALDI 可使用揮發性的基質和樣品,而且某些熱不穩定化合物在真空條件下由于激光灼熱引發的分解,將能在常壓狀態下由于空氣的對流冷卻而加以避免,此特點尤其適合對不穩定生物分子的 MALDI 質譜分析;

    5)AP/MALDI 具有出色的兼容性,能與主流廠家的各類型質譜儀(四級桿、TOF、離子阱、軌道阱、FTMS 等)聯接,并能與其他離子源(ESI、APCI、納噴源、DART、LESA、原位源、等)快速互換。而真空 MALDI 只能接 TOF 或 TOF/TOF,難以媲美高分辨質譜如 QE 或 FTMS 質譜的超高分辨率和靈敏度。


    image.png


    6. AP/MALDI 還有哪些優勢?

    AP/MALDI 除了具有與傳統真空 MALDI 源一樣的制樣簡單高通量復雜混合物的譜圖簡單易辨認等特點外,還有以下優勢:

    1) 樣品處理均在常壓下完成,避免真空制樣的不便;

    2) 是更柔和的離子源,只需較低能量產生離子,減少亞穩離子碎片的出現;

    3) 可作為相對獨立的離子源靈活地與各種形式質譜分析器偶聯;

    4) 保持原有儀器的高分辨率和高質量準度;

    5) 常壓電離形成均勻的離子云,電離更加連續穩定。

    除此之外,AP/MALDI 得到的主要是分子離子和準分子離子,碎片和多電荷離子較少,適合于分析脂質、多肽、蛋白質、核酸等生物類樣品。


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