高地辛標記的DNA探針制備實驗——基本方法

DNA

dTTPdUTPEDTASDS

水浴鍋培養箱

1.  建立一個標準100 μl 反應體系，用10 μl，10×地高辛·11-dUTP/dTTP貯液，DNA酶Ⅰ酶量不變，15℃溫育2 h。

2.  取小份在微型膠中進行電泳以檢測探針大小。

3.  繼續反應直到獲得大小合適的DNA探針。

4.  加入2 μl 0.5mol/l EDTA和1 μl 10%SDS，68℃加熱10 min 以終止反應。

5.  用G-50離心柱分離探針。

6.  用比色法或化學發光法測定地高辛標記的探針。

7.  用堿性磷酸酶偶聯的抗地高辛抗體代替鏈親和素-堿性磷酸酶交聯物。

8.  利用地高辛標記的標唯DNA或是標好的地高辛探針作為對照檢測地高辛摻入效率。