分析基因的功能常需要形成含有穩定整合了該基因的哺乳動物細胞系。在轉染中大約有1/104細胞將穩定整合外源因而可用一顯性（正向）選擇標記來分離穩定的轉化細胞。用可高效轉染的細胞系來確保轉染成功。另外，應包括合適的對照以確定目的基因無細胞毒性。
| 實驗材料 | 哺乳動物細胞 |
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| 試劑、試劑盒 | 完全培養液 |
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| 儀器、耗材 | 培養箱離心管 |
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| 實驗步驟 | 1. 確定所要轉染的細抱系能呈獨立集落生長。對于貼壁細胞，在10 cm 組織培養培養皿中接種約100個細胞，培養10~12天，毎4天換液1次。亞甲藍染色后對成活的細胞集落進行計數。 2. 確定母代細胞的選擇條件：將一培養皿上生長匯片的細胞按不小于1：15的比例分傳于含有不同藥物濃度的培養液中。培養10天。用合適的選擇培養液每4天換液1次， 并檢查活細胞。 3. 確定轉染母代細胞的最有效的方法。可選用磷酸鈣或電穿孔方法。對于磷酸鈣轉染，在加DNA的前1天，將母代細胞按1：15分傳中完全培養液中。 4. 用目的基因轉染母代細胞，含目的基因的質粒與含標記基因的質粒的摩爾比例不小于5：1。用擔體DNA替代含有目的基因的質粒作為對照，分別進行幾次轉染。
5. 在無選擇條件下讓細胞倍增2次。將細胞按1：15分傳于選擇培養液中。 6. 在選擇培養液中接種5個以上培養皿，以得到盡可能多的能挑取和擴增成細胞系的細胞集落數，每4天用選擇培養液換液，培養10~12天，將培養皿對著光成一角度觀察其中的細胞克隆，其中的一只培養皿直可進行染色以便于計算細胞集落數。挑取大的、生長良好的細胞集落。 收起 |
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| 注意事項 | 如果用5：1的比例，沒有必要在轉染前將透擇標記基因與目的基因連接起來：如果選擇需要用大量的選擇性質粒，有時無態保證5：1比例，故要將選擇標記基因及所要研究的目的基因構建在同一個質粒中。如果用含有所研究的基因進行轉染沒有形成克隆，而在含有的對照中卻可產生究隆，則所研究的基因能有細胞毒性。 |
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