中性粒細胞趨化試驗檢測IL8活性

實驗概要

在生物、化學或物理因素作用下，人體白細胞會產生一系列的具有生物活性（功能）的物質，其中的一個系列稱之為白細胞介素。白細胞介素已發現有許多種，白細胞介素8（IL－8）是其中之一，而且近來又發現除了白細胞外，其他一些細胞也有產生白細胞介素的能力。人體在防御和清除入侵病原體等異物時，有一種使白細胞趨集的功能，有一些物質能引起這種功能稱之為趨化劑或趨化因子，IL－8同時也是一種趨化因子。本實驗用中性粒細胞的遷移距離來反映IL-8活性。

實驗步驟

1. 配制2倍濃度的DMEM培養液100mL，其中含20mL的FCS，75mgNaHCO₃，置48℃水浴預溫。
2. 配制2％瓊脂糖，水浴中保溫48℃左右時，與上述2XDMEM等量混勻。
3. 制片(3mlJ片)，室溫凝固后，放4℃ 30～60min進一步凝固，打孔。
4. 分離人外周血中性粒細胞，用DMEM調整細胞濃度為2．5×10⁵／mL，取l0uL細胞懸液加人各組中心孔，上孔分別加10uL含趨化因子的待檢樣品及IL-8或其他陽性對照趨化因子，下孔加l0uLDMEM作陰性對照。
5. 將玻片放濕盒中，37℃溫育2h后，甲醇固定30min，瑞氏染液染片并干燥。
6. 顯微鏡下分別測量細胞從中心孔邊緣朝向樣品孔游走的距離(趨化游走距離)及朝向陰性對照孔的游走距離(自發游走距離)，趨化活性以趨化指數表示。
為證實樣品中趨化效應是IL-8特異的，還需將抗IL-8中和抗體先與待測樣品混合，孵育1h后，加入玻片孔中，觀察趨化反應。亦可用其他相關抗體阻斷試驗區別IL-8及其他趨化因子的作用。