根據調亡的生化特征的檢測方法
一、瓊脂糖凝膠電泳
1）常規的瓊脂糖凝膠電泳
方法一：
1．收集細胞（5×106）1000r/min，離心5min，去上清。
2．PBS洗一次，1000r/min，離心5min，去上清。
3．加細胞核裂解液500μl重懸細胞，50℃水浴，3～5h，不時振搖或37℃過夜。
4．加0.5ml平衡酚抽提，上下顛倒幾次混勻，6000r/min，離心5min。
5．上清移至另一Ep管，加0.5ml氯仿：異戊醇抽提，上下顛倒幾次混勻，6000r/min，離心5min。
6．上清移至另一Ep管，加50μl的3mol/L乙酸鈉和2ml預冷無水乙醇，上下顛倒幾次混勻，可見絮狀白色沉淀物。
7．置液氮5～10min，12 000r/min離心10min沉淀DNA，去上清，真空抽干或風扇下吹干殘存液體。
8．加50～100μl TE緩沖液，另加5μl RNase，37℃水浴30min。
9．取20μl加上樣緩沖液2～5μl，1％瓊脂糖凝膠電泳（電壓50V，1.5～2h），UV下觀察。
方法二：
1．離心收集細胞（5×106），PBS（無Ca2＋和Mg2＋）洗1～2次。
2．0.5ml TBE溶液重懸，37℃孵育30min。
3．1mg/ml蛋白酶K 37℃處理30min。
4．加入上樣緩沖液0.1ml。
5．25μl上樣，1.5％的瓊脂糖凝膠上電泳，2V/cm 6h。
方法三：
1．收集細胞懸液（106細胞），低速離心（1000r/min，離心5min）。
2．去上清，沉淀加0.4ml低滲緩沖液作用1h。
3．13 000r/min，離心10min，將上清轉移至另一Eppendorf管中，加等量50％異丙醇和0.5mol/L NaCl混勻，置液氮5min。
4．12 000r/min，離心10min，棄上清，沉淀真空抽干。
5．加TE 100μl，65℃加熱10min，取20μl，加1～2μl上樣緩沖液，電泳觀察。
方法四：
1．收集細胞，1000r/min離心5min，去上清。
2．用冰預冷的70％乙醇固定，可長期保存于－20℃冰箱。
3．1000r/min離心5min，去除固定液，用約0.5ml的PBS重懸細胞。
4．轉入Eppendorf管中，同法離心，去上清。
5．細胞用40μl PC緩沖液重懸，室溫30～60min。
6．1000r/min離心5min，吸上清于新的Eppendorf管中，真空濃縮15min。
7．加入0.25％ NP-40溶液3μl，1mg/ml RNase A溶液3μl，37℃，30min。
8．加入3μl蛋白酶K，37℃，30min。
9．加入12μl樣品稀釋液，含溴化乙錠的1.5％瓊脂糖電泳，觀察。
2）瓊脂糖凝膠電泳的定量檢測
簡易末端標記法
1．按常規提取細胞DNA。
2．在0.5ml的EP管中加入細胞DNA，反應體系如下：細胞DNA 0.5～1.0μg，10×緩沖液2μl，32P-dATP（或-dCTP）0.5μCi，Klenow聚合酶5U，雙蒸水加至20μl。
3．混勻后稍加離心，室溫反應30min。
4．加1μl 0.5mol EDTA終止反應。
5．常規酚/氯仿/異戊醇抽提1次，無水乙醇沉淀DNA，真空抽干。
6．溶于20μl的TE緩沖液中。
7．取標記DNA在1.8％瓊脂糖凝膠上點樣，50V電泳約2h。
8．電泳后的凝集置濾紙上烘干，進行放射自顯影。
5’末端32P標記法
細胞DNA的提取
1．細胞懸液離心后，沉淀加消化緩沖液0.5ml，50℃ 3～5h，或37℃過夜。
2．用等體積的酚：氯仿：異戊醇抽提細胞裂解液。
3．將水相轉移至新的試管，加入150mmol/L乙酸鈉和10mmol/L氯化鎂。
4．加入2倍體積的預冷無水乙醇，置液氮5min或－20℃ 12h。
5．12 000r/min離心沉淀DNA，70％乙醇洗1次后，真空抽干。
6．溶于20μl的TE緩沖液中。
7．加入終濃度為10μg/ml RNase，37℃，30min。
8．同法用等體積酚：氯仿：異戊醇抽提，乙醇沉淀，真空抽干。
9．溶液20μl的TE緩沖液中，－20℃保存備用。DNA含量測定：用260nm波長紫外分光光度計：吸光單位為20時約為1mg/ml DNA。
DNA 5’末端脫磷酸
1．取純化的細胞DNA 10μg，然后加入：10×CIP 2μl（1U），雙蒸水加至50μl。
2．37℃水浴2h。
3．90℃水浴5min以滅活CIP。
4．用等體積酚：氯仿：異戊醇抽提，乙醇沉淀，真空抽干。
DNA 5’末端32P標記
1．將脫磷酸樣品DNA置冰浴上，再加雙蒸水10μl，10×緩沖液2μl，T4多核苷酸激酶10U，32P-ATP 740kBq（20μCi），雙蒸水加至20μl。
2．混合后，37℃水浴60min。
3．加入1μl的0.5mol/L EDTA，90℃滅活5min。
觀測
1．取一定量的標記DNA稀釋后在1.8％瓊脂糖凝膠上點樣，50V電泳約2h。
2．電泳后的凝膠置濾紙上烘干，進行放射自顯影。
3．含32P標記DNA電泳干凝膠進行同位素液閃測定，計算放射活性。
二、原位末端標記技術 1）DNA聚合酶或Klenow大片段介導的原位缺口平移（ISNT） 1．切片常規脫蠟，梯度乙醇復水化。 2．將切片組織浸入2×SSC液中，80℃，20min，然后蒸餾水沖盡。 3．0.5％胃蛋白酶（pH2.0