細胞凋亡檢測:生化特征的檢測方法
根據調亡的生化特征的檢測方法一、瓊脂糖凝膠電泳1)常規的瓊脂糖凝膠電泳方法一:1.收集細胞(5×106)1000r/min,離心5min,去上清。2.PBS洗一次,1000r/min,離心5min,去上清。3.加細胞核裂解液500μl重懸細胞,50℃水浴,3~5h,不時振搖或37℃過夜。4.加0.5ml平衡酚抽提,上下顛倒幾次混勻,6000r/min,離心5min。5.上清移至另一Ep管,加0.5ml氯仿:異戊醇抽提,上下顛倒幾次混勻,6000r/min,離心5min。6.上清移至另一Ep管,加50μl的3mol/L乙酸鈉和2ml預冷無水乙醇,上下顛倒幾次混勻,可見絮狀白色沉淀物。7.置液氮5~10min,12 000r/min離心10min沉淀DNA,去上清,真空抽干或風扇下吹干殘存液體。8.加50~100μl TE緩沖液,另加5μl RNase,37℃水浴30min。9.取20μl加上樣緩沖液2~5μl,1%瓊脂糖凝膠電泳(......閱讀全文
細胞凋亡檢測:生化特征的檢測方法
根據調亡的生化特征的檢測方法一、瓊脂糖凝膠電泳1)常規的瓊脂糖凝膠電泳方法一:1.收集細胞(5×106)1000r/min,離心5min,去上清。2.PBS洗一次,1000r/min,離心5min,去上清。3.加細胞核裂解液500μl重懸細胞,50℃水浴,3~5h,不時振搖或37℃過夜。4.加0.5
細胞凋亡檢測:形態學特征的檢測方法
根據調亡形態學特征的檢測方法?一、普通光學顯微鏡觀察方法?1?)蘇木素-伊紅染色(?HE?染色法)?石蠟組織切片的?HE?染色1.?取材組織塊,經固定后,常規石蠟包埋,?4?μ?m?切片。2.?切片常規用二甲苯脫蠟,經各級乙醇至水洗:二甲苯(?I?)?5min?→二甲苯(Ⅱ)?5min?→?100%
細胞凋亡檢測:形態學特征的檢測方法
根據調亡形態學特征的檢測方法一、普通光學顯微鏡觀察方法1)蘇木素-伊紅染色(HE染色法)石蠟組織切片的HE染色1.取材組織塊,經固定后,常規石蠟包埋,4μm切片。2.切片常規用二甲苯脫蠟,經各級乙醇至水洗:二甲苯(I)5min→二甲苯(Ⅱ)5min→100%乙醇2min→95%的乙醇1min→80%
細胞凋亡檢測:形態學特征的檢測方法-1
一、普通光學顯微鏡觀察方法(一)蘇木素-伊紅染色(HE 染色法)石蠟組織切片的HE染色1、取材組織塊,經固定后,常規石蠟包埋,4μm切片。2、切片常規用二甲苯脫蠟,經各級乙醇至水洗:二甲苯(I)5min→二甲苯(Ⅱ)5min→100%乙醇2min→95%的乙醇1min→80%乙醇1min→75%乙醇
細胞凋亡檢測:形態學特征的檢測方法-2
二、透射電子顯微鏡觀察方法培養細胞的取材和固定1、常規收集帖壁和懸浮細胞,置離心管中離心, 800 ~ 1000r/min , 10min 。2、用 0.01mol/L PBS 5ml 重懸細胞。3、將細胞懸液吸入有瓊脂空槽的離心管中。4、離心, 2000r/min , 15 ~ 20min ,使細
細胞凋亡,細胞凋亡通路和細胞凋亡檢測的幾種檢測方法
一、形態學觀察方法 1、HE染色、光鏡觀察:細胞凋亡后呈圓形,胞核深染,胞質濃縮,染色質成團塊狀,細胞表面有“出芽”現象。 2、丫啶橙(AO)染色,熒光顯微鏡觀察:活細胞核呈黃綠色熒光,胞質呈紅色熒光。細胞凋亡|后(細胞凋亡,細胞凋亡通路,細胞凋亡檢測)核染色質呈黃綠色濃聚在核膜內側
細胞凋亡通路和細胞凋亡檢測的幾種檢測方法
一、形態學觀察方法1、HE染色、光鏡觀察:細胞凋亡后呈圓形,胞核深染,胞質濃縮,染色質成團塊狀,細胞表面有“出芽”現象。2、丫啶橙(AO)染色,熒光顯微鏡觀察:活細胞核呈黃綠色熒光,胞質呈紅色熒光。細胞凋亡|后(細胞凋亡,細胞凋亡通路,細胞凋亡檢測)核染色質呈黃綠色濃聚在核膜內側,可見細胞膜呈泡狀膨
細胞凋亡檢測方法
細胞凋亡與壞死是兩種完全不同的細胞凋亡形式,根據死亡細胞在形態學、生物化學和分子生物學上的差別,可以將二者區別開來。細胞凋亡的檢測方法有很多,下面介紹幾種常用的測定方法。一、細胞凋亡的形態學檢測 根據凋亡細胞固有的形態特征,人們已經設計了許多不同的細胞凋亡形態學檢測方法。 1 光學顯微鏡和倒
細胞凋亡檢測方法
細胞發生凋亡時,不同區域內(如細胞膜、細胞漿、線粒體、細胞核等)會發生不同的生理生化改變。因此,針對不同區域的細胞凋亡檢測要采用不同的方法。1)Annexin V 凋亡檢測原理:Annexin?Ⅴ是一種分子量為35-36kD的Ca依賴性磷脂結合蛋白,正常細胞中,磷脂酰絲氨酸(phosphatidyl
細胞凋亡的檢測方法
(一) 測原理細胞發生凋亡時,其細胞膜?的通透性也增加,但其程度介于正常細胞和壞死細胞之間。利用這一特點,被檢測細胞懸液用熒光素染色,利用流式細胞儀測量細胞懸液中熒光強度來區分正常細胞、壞死細胞和凋亡細胞。(二) 用價值流式細胞儀檢測有下列特點:(1)檢測的細胞數量大,因此其反映群體細胞的凋亡狀態比