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  • 發布時間:2019-05-20 18:51 原文鏈接: 核酸抽提

    最糟糕的心態 - 實驗失敗了,抱怨試劑不好。實驗人員本來是應該擁有修正主義、機會主義、懷疑論等諸多“不完美的”意識,所以一定要用“完美的”自我批評意識來平衡。我為什么沒有一雙慧眼選擇可靠的供應商?我為什么不做預實驗檢測所購試劑?

    最糟糕的知識 - RNase A 的作用。RNase A 是內切酶,內切酶的作用結果是產生片段,而不是單個核苷酸,所以,RNase A 作用于 RNA 的結果是:大的 RNA 變成小的 RNA。為什么不同批次或者不同公司的 RNase A 消化 RNA 的結果不一樣呢?因為 RNase A 的純度不同:RNase A 純度越高,則RNA 殘留的片段就越大!事實上,RNase 的粗制品去除 RNA 的效果是最徹底的,但現在幾乎沒有公司銷售了,可能的原因,一是生產粗制品成本更高,二是其中的雜質可能對 DNA 的完整性有影響。

    最糟糕的試劑 - 水。水是所有實驗都必須用到的試劑,但卻沒有人將她當做試劑。復旦的蒸餾原水肯定可以養魚,因為一周就會出現藍藻。涉及到酶反應的水,最好用去離子水。

    最糟糕的儀器 - 分光光度儀 (核酸分析儀)。太精密,也太集成,使用者在它們面前非常弱勢,又不甘于弱勢,于是就堅信該儀器的結果;生產商再推出更簡潔的設計,到今天,分光光度儀 (核酸分析儀) 真的成為傻瓜儀了。常識告訴我,越是精密的東西,其對外界干擾的反應越激烈。我也沒有搞懂這個東西,只是知道:給它配一個穩壓電源;將它的家安在震動最小的地方 - 決不與離心機同臺;如果出現了不可解釋的結果,寧可相信儀器在發脾氣。

    最糟糕的操作 - 去除離心管中的溶液。將離心管中的液體倒掉,能倒得多徹底?不同的離心管會有不同,但殘留量絕對會出乎想象的。該操作是如此的常見,強烈建議自行實驗看一看:在下次做核酸抽提時,75% 乙醇洗滌后離心,倒掉乙醇,再將離心管置于離心機短暫離心,看一看有多少殘留液體。不要以為乙醇會揮發就無所謂,鹽可不會揮發。常規實驗之所以難做到 100% 順利,其原因就在于沒有消除前面的隱患 – 隱患者,偶爾為之是也。

    最糟糕的遺忘 - 產品目錄。知名公司的產品目錄絕對是一個寶庫。知名公司產品目錄中的知識,其可靠程度遠遠大于參考書。當“分子克隆”與 Sigma 關于某一問題的解釋矛盾時,我選擇 Sigma 的解釋。知名公司似乎深諳一點:在研究人員眼里,他們的知識錯誤更易被解釋為欺騙,而參考書中的錯誤,我們是會寬容的;同人相輕,但只是人民內部矛盾,而與公司之間是敵我矛盾。

    最糟糕的懶惰 - 苯酚的 pH 值測定。“分子克隆”、Sigma、Invitrogen 都有關于 Tris 飽和苯酚的 pH 值的判斷方法: “分子克隆”測酚相,Sigma 測水相,Invitrogen 測稀釋的酚相。同一瓶 Tris 飽和苯酚,用這三個方法 (pH 試紙) 測定的結果是什么樣的?新版“分子克隆”改掉了上一版關于 RNase A 滅活 DNase 操作的錯誤,下一版應該會改掉關于測定苯酚 pH 值的錯誤吧。

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