HIV初篩實驗室篩查檢驗程序

1、篩查試劑
必須是經國家食品藥品監督管理局注冊批準、批批檢合格、在有效期內的試劑。推薦使用經臨床質量評估敏感性和特異性高的試劑。
2、篩查方法
（1）、常用的篩查方法是酶聯免疫試驗（ELISA）
目前國內外主要使用第三代（雙抗原夾心法）試劑，少數使用第二代試劑。血源篩查仍以第三代ELISA為主，國際上有些國家和地區已將線性免疫酶測定（第四代ELISA試劑）用于血源篩查。第四代ELISA試劑是最近發展起來的HIV抗原抗體聯合測定試劑，可同時檢測P24抗原和抗HIV-1/2抗體。與第三代抗HIV-1/2試劑相比，檢出時間提前了4～9d。其優點在于能同時檢測抗原抗體，降低血源篩查的殘余危險度。
（2）、快速檢測（RT）及其它檢測 
 隨著對HIV感染者和AIDS病人抗逆轉錄病毒治療的進展，及對無癥狀HIV感染者提供自愿咨詢檢測（VCT）的迫切需求，簡便、快速的HIV檢測方法被廣泛應用。常用的主要有以下幾種：
①、明膠顆粒凝集試驗（PA）：PA是HIV血清抗體檢測的一種簡便方法，是將HIV抗原致敏明膠顆粒作為載體，與待檢樣品作用，混勻后保溫（一般為室溫）。當待檢樣品含有HIV抗體時，經抗原致敏的明膠顆粒與抗體發生抗原-抗體反應，根據明膠顆粒在孔中的凝集情況判讀結果。PA試劑有兩種，HIV-1和HIV-2抗原共同致敏的PA試劑（AFD HIV-1/2 PA），已經我國食品藥品監督管理局（SFDA）注冊批準；HIV-1、HIV-2抗原分別致敏的PA試劑（SERODIA-HIV-1/2）可初步區分HIV-1型和HIV-2型，目前我國尚未引進。
②、斑點EIA或稱斑點ELISA（dot-EIA）：以硝酸纖維膜為載體，將HIV抗原滴在膜上成點狀，即為固相抗原。加血清樣品作用，以后步驟同ELISA。陽性結果在膜上抗原部位顯示出有色斑點。反應時間在10 min以內，使用抗原量少。
③、斑點免疫膠體金（或膠體硒）快速試驗：與斑點EIA相似，也是以硝酸纖維膜為載體。區別在于不用酶標記抗體，而代之以紅色的膠體金（或膠體硒）A蛋白，用滲濾法作為洗滌方法。試劑穩定，可室溫長期保存。試驗時不需任何設備，迅速、簡便、特異性較好，敏感性約相當于中度敏感的ELISA，適用于應急檢測、門診急診個體檢測。目前已有在國內被SFDA批準注冊的國外進口試劑和國內產品。一般可在10～30min內判讀結果。
④、艾滋病唾液檢測卡：在硝酸纖維膜上包被人工合成的HIVgp41/gp36蛋白抗原，可同時檢測含在唾液中的HIV-1/HIV-2抗體，原理為酶免疫間接法。主要檢測唾液中的HIV IgA與IgG抗體，敏感性特異性與ELISA相近，可避免靜脈穿刺。但樣品預處理時間長且售價較高。以唾液為樣品測定HIV抗體的ELISA、免疫印跡法（WB）試劑已經美國FDA批準。
⑤、其它快速篩查試驗方法：家庭HIV檢測（Home Access System）等。
3、尿液HIV抗體檢測
1996年美國FDA首次批準HIV-1尿液ELISA試劑，我國也正在研制尿液HIV抗體檢測試劑。主要適用于靜脈注射毒品（IDUs）人群和其它高危人群的大面積流行病學調查、監測。篩查陽性者仍需采血做確認試驗才能確定。
4、篩查試驗
根據檢測目的選用符合要求的篩查試劑對樣品進行初篩和重復檢測（復檢）。
5、初篩試驗：以第三代ELISA（雙抗原夾心法）為例。
（1）實驗準備：試驗開始前將試劑和樣品放置在室溫(18?23℃), 按實驗室SOP做好試劑準備。
磷酸鹽緩沖液：若液體內有結晶,應放置在37℃直至溶解，用蒸餾水1：25稀釋濃縮液，4℃保存2周。
TMB底物液：使用前配制，TMB液和過氧化脲液等量混勻。
1M硫酸終止液：85 ml蒸餾水中加入5 ml濃硫酸。
備好試劑盒、待檢樣品和外部對照質控血清后，按試劑盒說明書以及質控和安全防護要求進行篩查檢測。（2）實驗操作
①、裝好所需使用數目的孔條,每孔均加入100μl樣品稀釋液。設3個陰性對照孔，1個HIV-1陽性對照孔，若需要可再設1個HIV-2陽性對照孔。
②、每孔加入50μl待檢樣品及對照（對照要后加），未用孔用樣品稀釋液加滿以溶解結合物球，以免堵塞洗板機孔。可震搖15S，37±2℃孵育60±5min。
③、置洗板機上洗滌6遍（用洗液將反應孔完全加滿,靜置30?60S,共洗滌6遍，洗完后孔上方及底部不應殘存液體,禁止在濾紙上拍干）。
④、每孔加入100μl底物液，勿攪動，室溫避光孵育30±2min。
⑤、每孔加入100μl 1M硫酸終止反應，充分混勻。
⑥、在2h內置于酶標儀讀數，單波長450nm，或雙波長450/630nm測OD值。
（3）實驗結果