熒光定量PCR檢測HPVDNA相關介紹

發布時間：2019-06-24 18:16 原文鏈接：熒光定量PCR檢測HPVDNA相關介紹

（一）熒光PCR HPV DNA檢測

　　HPV感染是子宮頸癌及其癌前病變（子宮頸上皮內瘤樣變）的主要病因。因此，可以將檢測HPV感染作為子宮頸癌的一種篩查手段。HPV-DNA檢測發現高度病變的敏感度為97.7%~100%，平均為98.6%，比細胞學檢查高二十多個百分點。如果將兩者結合進行檢查，敏感度可達100%。2000年在巴黎召開的“EUROGIN”子宮頸癌全球全球防御大會一致認為：HPV DNA檢測是宮頸病變及宮頸癌篩查的最佳方法。2003年美國FDA將HPV DNA檢測列為婦女常規檢測項目。HPV DNA檢測在2002年被美國癌癥協會指南采納、2003年被美國婦產科學會指南采納、2004年被美國婦科腫瘤學會指南采納、2003年被中國宮頸癌篩查及早診早治指引采納。

　　熒光PCR DNA檢測是HPV DNA檢測技術中最有效最準確的宮頸癌早期檢測手段。

（1）工作原理- 熒光定量PCR

　　在探針完好的情況下情況下，由于存在能量轉移，其5’端熒光報告基團的熒光被3’淬滅劑所淬滅，當引物延伸時，由于Taq酶的核酸外切酶活性，熒光探針被切斷，探針5’端熒光報告基團被釋放，而且每合成一個DNA分子，就有一個熒光信號被釋放。被釋放的激離報告熒光基團的數目和PCR產物是一對一的關系。

（2）臨床應用

A、宮頸癌的篩查

　　HPV檢測的陰性預測值為99.9％，可將篩查間隔延長至5年一次，由于降低的檢查成本遠遠多于因采用HPV檢測所增加的費用；

　　HPV陽性而細胞學涂片正常的婦女中10％會在4年內發展成CIN II或CIN III；B、輔助細胞學檢查

　　通過HPV檢測排除可疑的或低度病變（ASCUS），從而提高診斷的可信度。

　　ASCUS約占篩查人群的7-10％，大部分的HSIL在這些ASCUS中發現。

　　降低漏診的風險。

　　把具有潛在患宮頸癌風險的婦女從低風險人群中區分出來，從而指導陰道鏡的合理使用。

　　HPV檢測提供更加客觀、快捷的結果，可很信心地把HPV陰性的婦女重新放回常規篩查人群中。

C、手術后隨訪

　　可預測病變惡化或術后復發的風險，有效指導術后追蹤。

　　手術后6個月、12個月HPV檢測陰性，提示病灶切除干凈，可最大限度減少病人的焦慮。

　　若術后HPV檢測陽性，提示有殘留病灶及有復發的可能性。

（3）臨床診斷操作流程

（二）HPV檢測方法比較

　HPV檢測方法有斑點印跡法、熒光原位雜交法、原位雜交法、Southern雜交法、熒光PCR法和雜交捕獲法等，部分方法的優缺點總結如下表。
（三）宮頸癌的其他檢測方法

（1）細胞學涂片——重要但不完美的篩查方法

　　A、巴氏涂片：是傳統的宮頸涂片法，檢查時用刮板在宮頸上刮取一些表層脫落細胞，然后在顯微鏡下觀察以判別細胞的病變情況。

　　巴氏涂片檢測分級：巴氏Ⅰ為正常；巴氏Ⅱ為炎癥；巴氏Ⅲ為可疑癌；巴氏Ⅳ為癌可疑；巴氏Ⅴ為癌。

　　為什么說巴氏涂片檢查"是成功的也是可悲的"？可以從下面幾個方面理解：巴氏涂片的應用,使子宮頸癌的發生率下降70%~80%；但據1989年的報告,在美國每年為巴氏涂片篩查耗資高達60億美元.相信到現在已遠不止這個數了；可是雖然有完善的細胞學篩查計劃及大量資金支持,美國每年仍有14,000個宮頸癌新發病例,4,500個婦女死于宮頸癌。