血液檢驗室內質控存在的若干問題及其對策

   室內質量控制(IQC)是由實驗室人員采用一系列方法，連續的評價本實驗室工作的可靠程度，確定報告能否發出，是保證實驗室工作質量的重要措施。目前血站系統檢測抗HCV、抗-HIV　HBsAg均采用ELISA法。ELISA有其自身的特點如靈敏度較高，同時影響因素也較多，這就更需加強質量控制。本文就實驗過程中出現的一些問題及其對策報告如下。

1　質控物

　　室內質控的開展要求有高質量的質控物，質控物的好壞直接影響監測，一般基層單位均選用衛生部臨檢中心提供的免疫質控血清，其具有良好的質量保證，但是在貯存運輸和使用過程中受許多因素的影響。質控物的購買應避開7、8、9高溫季節，以免郵寄過程中造成含量下降。質控物要求-20℃保存，而質控物含量較低，4℃存放也會使含量下降，一般HBsAg使用3d，抗-HCV使用1周即需更換。避免反復凍融，因反復凍融能使蛋白質變性抗原成份及空間構象發生改變。還可選用上海或其他血液中心提供質控品，作可比性試驗以驗證。

2　試劑

　　1994年10月起衛生部對體外診斷試劑實行統一管理批批檢定。目前使用的國內試劑廠家很多，能通過批批檢只是起碼要求，其靈敏度和特異性都有差異。加之運輸儲存多種因素影響，到用戶使用時質量已經發生了不同程度的變化。選購試劑時，省級以上的血液中心可以成立“試劑評價系統” ［1］ ，由質控科、檢驗科、研究所共同參與組成，研究所研制供應血清盤并制定標準，質控科負責用研究所供應血清盤對新購試劑評價，檢驗科在大標本的篩選中評價現用試劑日間差、板間差、初復檢陽性率比較及操作可行性；基層單位用量少每批都做Panel是不現實的，希望衛生主管部門能否提供一種排除商業性具有指導意義的方案或者提供價低質高的血清盤。就目前可參考權威部門發布的試劑評價結果，還可到大血站、臨檢中心等單位了解一下哪種廠家哪一批次的質量可靠，然后向廠家查詢丙肝的包被片段，初檢試劑選片段多而全、靈敏度高的，復檢選特異性好的試劑。

3　加樣與稀釋

　　3.1　由于免疫試驗加樣僅10μl，多加或少加1μl就可造成10%的誤差，因此移液器的準確性需經常校驗，最好使用進口移液器，同時移液器和移液頭間連接應嚴密，建議取樣時移液頭應剛進液面，以免粘帶血清。稀釋液勿用滴瓶滴加，以免造成稀釋倍數的變化，對灰帶區造成誤判，使用移液器加樣較穩定。

　　3.2　稀釋方式①在板中加入100μl稀釋液再加10μl標本，待樣品全部加完混勻；②預先進行1∶11稀釋然后加到每孔中；③在板中加入100μl稀釋液再加10μl標本，同時吹吸3次混勻。根據陳宇 ［2］ 的報道第1種方式易致非特異性IgG吸附到包被抗原或固相載體上，第2種方式在大量標本檢測時亦不適用，以第3種方式為好。

4　溫育

　　37℃溫育常采用3種方式即恒溫培養箱、水浴箱和電熱塊，根據張利等 ［3］ 的報道以恒溫培養箱為佳，由于培養箱中板的周圍都是37℃，而水浴箱的溫度指標的是水的溫度，雖然酶標板漂浮在37℃水浴中板底37℃，但空氣溫度在開蓋時會下降(尤其在冬季)，溫度上升比培養箱慢，達到37℃所需時間長，導致吸光度下降。

5　洗板

　　一般基層單位洗板機不提倡使用96孔頭而選用8或12孔頭，應隨時注意孔頭是否堵塞，同時要求洗板后殘液＜2μl即人工扣板墊紙不濕，浸泡時間＞45s。洗液預先用合格的蒸餾水配制并充分溶解，保持PH正常。定期清洗容器防止長菌長霉，這些都是防止花板、本底增高的重要措施。

6　顯色

　　嚴格按說明書控制顯色時間、溫度以免人為造成吸光度升降，而影響灰區結果，加終止液后及時比色。TMB被認為是ELISA反應中最佳色原底物，但終止15min后高濃度者易產生灰褐色絮狀沉淀并伴黃色漸退吸光度下降，建議終止15min內及時比色 ［4］ 。

7　酶標儀性能評價與鑒定

　　衛生部明確規定酶標試劑不得用目測法判結果，儀器和設備是搞好質控和日常工作的前提和保證。成軍等 ［5］ 介紹了一套以490nm、甲基橙溶液為例的酶標儀的評價方法，內容包括濾光片波長、零點飄移、線性、精密度、通道差與孔間差等，具有較高的實用價值。經常維護其光學部分防止濾光片霉變、定期檢測校正，使其保持良好的工作性能。

8　質控圖的制作

　　ELISA室內質控方法一般沿用生化L-J圖進行，利用Westgard規則判定失控，應首先做好OCV和RCVK以確定失控標準，在實際工作中取得很好效果。“即刻法” ［6］ 質控只需連測3次即可對第3次進行質控，給基層單位帶來了方便。但是其SDI設置是套用生化的手段，在免疫檢測中是否適用尚無定論，同時L-J圖不能判ELISA的特異性。鑒于ELISA試驗目的在于檢出抗原或抗體，因此要確保敏感性和特異性，故許斌 ［7］ 提出臨界值血清界定法：試劑所設陰陽對照為內對照，另設臨界值、高值陽性和2份正常人陰性對照，作為外對照與標本同時檢測，臨界值S／CO＞1，高值陽性S／CO＞10，正常人陰性對照A值在0.050～0.100，只要一項不符合即判為失控，其中臨界值為敏感度監控、陰性對照為特異性監控、高值為“HOOK”監控，因此臨界值血清界定既反映ELISA的靈敏度又兼顧特異性，實際工作中和質控圖一起應用。

9　結論

　　室內質控的目的在于能控制實驗室每天的檢測結果是否可靠，能否報告，是實驗室管理的最基本措施。臨界值血清做室內質控血清可防止弱陽性標本漏檢，每次實驗時隨獻血者標本加測，每板一孔如未失控證明實驗可靠，原始記錄保存可作因輸血所致醫療糾紛的一個關鍵證據。實驗過程中失控現象時有發生且以超過下限為多見，致臨界值結果陰性，此點應引起特點重視，必須將失控板重做并找出原因，以確保報告準確性。由于開展了室內質控，工作人員責任心加強了，操作更規范，提高了實驗檢測的準確性，有效保證了血液的質量。

參考文獻

　　1，高東英.采供血機構體外免疫診斷試劑評價系統的初步探討.中國輸血雜志，1999；12(1)∶56

　　2，陳　宇.加樣方式影響ELISA檢測抗HCV結果.臨床檢驗雜志，1996；14(3)∶151

　　3，張　利，李　博，李　文.兩種溫育方式對ELISA檢測抗HCV結果影響.中國輸血雜志，1997；10(4)∶196

　　4，田　昱，鄒榮良，陸偉石.四甲基聯苯胺作色原的ELISA兩種波長測定.臨床檢驗雜志，1995；13(3)∶140

　　5，成　軍，孫關忠，李早榮等.酶標儀性能評價與鑒定的基本方法及應用，見：鄭杯竟，邢文革主編.免疫檢驗與臨床疾病安全輸血.北京醫科大中國協和醫科大聯合出版.1997；265～272

　　6，鄭懷競.免疫學檢驗室內質評與室間質評.北京醫科大中國協和醫科大聯合出版.1997；49～53

　　7，許　斌，毛愛珍.EILSA定性試驗室內質控.臨床檢驗雜志，1996；14(3)∶124